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作者：乔璐;柳海云;杨健;黄国梁;郭慧琛;孙世琪;牛家强;
单位：西藏农牧大学动物科学学院农业农村部西藏包虫病防治重点实验室西藏高原动物疫病研究自治区高校重点实验室;中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;
摘要：本研究旨在建立一种猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）类NADC30株（NADC30-like）和高致病PRRSV(HP-PRRSV)鉴别诊断的RT-PCR方法，为该病的检测和防控提供依据。根据PRRSV Nsp2基因核苷酸序列特征，设计一种可同时鉴定HP-PRRSV和NADC30-like株的RT-PCR方法。结果显示，该方法扩增出的HP-PRRSV和NADC30-like株Nsp2基因片段分别为931 bp和628 bp，最低检测下限分别为472 copies/μL和132 copies/μL，对其他基因亚型PRRSV和病毒均未扩增出特异性条带。针对此方法，分离优势毒株并纯化。对来自甘肃省部分地区猪场的196份临床样品进行检测，发现28份样品为HP-PRRSV核酸阳性，15份样品为NADC30-like核酸阳性，3份样品为HP-PRRSV+NADC30-like核酸阳性；RT-PCR检测ORF5基因，发现HP-PRRSV和NADC30-like核酸阳性样品数量分别为37份和9份，但未发现混合感染样品；分离优势毒株，得到了传代稳定的病毒；纯化后获得了纯度较高且结构完整的病毒粒子。本研究建立的RT-PCR方法可用于HP-PRRSV和NADC30-like株快速鉴别诊断和分子流行病学调查研究，但其灵敏度稍差；且其无法检测其他PRRSV亚型毒株。
关键词：HP-PRRSV;;NADC30-like;;鉴别诊断;;RT-PCR;;分离纯化
基金资助：兰州市人才项目（2024-QN-3,2023-RC-3）;; 甘肃省自然科学基金项目（23JRRA551,24JRRA012）;; 甘肃省青年科技基金项目（25JRRA442）
