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作者：谢佳芮;王轶男;寇美玲;苗海生;
单位：云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室;
摘要：旨在解决传统口蹄疫病毒（FMDV）多克隆抗体ELISA检测中存在的非特异性反应问题，开发针对中国和东南亚地区流行的A型FMDV SEA-97拓扑型毒株的高特异性单克隆抗体的制备与检测方法。通过基于亚洲流行的A型FMDV SEA-97拓扑型毒株的VP1基因，构建重组表达质粒，用原核系统高效表达并纯化VP1蛋白。采用三步筛选策略（间接ELISA初筛、竞争ELISA验证、血清型特异性鉴定），从免疫的BALB/c小鼠中筛选出稳定分泌A型FMDV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系（10H2-F2），亚型鉴定为Ig G1/κ。建立基于单克隆抗体的竞争ELISA，优化抗原包被条件，显著提升检测性能。与O型FMDV及其他9种偶蹄动物病原体（如猪瘟病毒、猪繁殖和呼吸综合征病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒、伪狂犬病病毒、蓝舌病病毒、牛病毒性腹泻病毒、羊痘病毒、赤羽病病毒）无交叉反应（抑制率≤22%）；可检测A型FMDV阳性血清256倍稀释样本，较现有方法提升2倍；与血清中和试验的总符合率达97.3%(Kappa=0.945 2)；单克隆抗体在4℃和-20℃保存6个月后抑制率变异系数<0.3%，批间重复性优异（F=0.2,P>0.8）。结果表明，建立的竞争ELISA方法具有高度特异性、敏感性及稳定性，为亚洲地区A型FMDV抗体精准检测、疫苗免疫效果评估及疫情监测提供了可靠技术支撑，填补了针对区域性流行毒株的特异性诊断工具的空白。
关键词：A型口蹄疫病毒;;VP1基因;;单克隆抗体;;cELISA检测方法;;血清型特异性
基金资助：广西重点研发计划项目（桂科AB25069499）;; 云南省创新引导与科技型企业培育计划项目（202304BI090001）;; 云南省“畜禽种质创新及标准化养殖技术推广”专项;; 云南省科技人才与平台计划项目（202205AF150007）
