来源：期刊VIP网 时间：
作者：王梦迪;钟宁远;冷楠楠;蒋蔚;余祖功;阿曼古丽·斯拉依;韩先干;
单位：中国农业科学院上海兽医研究所;南京农业大学动物医学院;新疆伊犁哈萨克自治州动物疾病控制与诊断中心;
摘要：为建立一种快速准确检测鸭疫里默氏杆菌（RA）抗体且便于基层推广应用的间接ELISA方法，通过方阵滴定法优化ELISA抗原包被条件、抗原稀释浓度、血清稀释浓度以及二抗孵育时间、二抗稀释度等，综合评估该检测方法的敏感性、特异性等。结果显示，建立的间接ELISA检测方法抗原最佳包被浓度为10~9CFU/m L、抗原的最佳包被条件为37℃包被2 h，一抗的血清最佳稀释度为1∶1 600，封闭液以50 g/L脱脂乳为最佳，最佳封闭条件为37℃1 h，一抗最佳孵育条件为37℃2 h，酶标二抗最佳反应条件为37℃2 h、酶标二抗的最佳稀释度为1∶5 000，最佳显色时间为20 min。以RA-CQ3（血清1型）为靶标抗原包被时，待检阳性血清稀释度达到1∶12 800时和以RA-NJ2（血清2型）为靶标抗原包被时，待检阳性血清稀释度达到1∶25 600时仍可用临界值判定，表明该方法具有良好的敏感性。特异性试验结果显示，RA抗原不与O1型禽致病性大肠杆菌、鸭病毒性肠炎病毒、呼肠孤病毒DRV-TH11、呼肠孤病毒DRV-Gu8、4型禽腺病毒、鸭甲肝病毒3型阳性血清发生反应，表明建立的ELISA方法特异性较好。结果表明，成功建立了一种快速、敏感的检测鸭疫里默氏杆菌抗体的方法，可为鸭疫里默氏杆菌病的流行病学调查和临床RA抗体检测提供技术支持。
关键词：鸭疫里默氏杆菌;;间接ELISA;;优化;;方法建立
基金资助：上海市农业科技创新项目：重要人兽共患病人工智能预警防控平台的创制及应用（沪农科T2023106）
