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作者：郑诗源;黄益曼;孟小草;贺佳阳;宋敬东;麻粉莲;郑丽舒;
单位：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,传染病溯源预警和智能决策全国重点实验室,国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室;中国医科大学公共卫生学院;
摘要：为制备一种安全、有效的人偏肺病毒（Human metapneumovirus,HMPV）假病毒阳性标准品，并用于核酸检测的质量控制，本研究对335条HMPV全基因序列比对分析，选择HMPV基因表达量高且进化较为保守的N基因构建重组假病毒颗粒。合成全长1 185 bp的N基因序列并与CD513B载体进行重组连接，采用第三代慢病毒包装体系构建HMPV假病毒颗粒，超速离心浓缩后感染HEK293T细胞，RT-qPCR核酸检测N基因和透射电镜观察鉴定重组假病毒颗粒，确定假病毒阳性标准品使用浓度，进一步评价阳性标准品的热稳定性和均一性。研究结果显示，包装获得的HMPV假病毒颗粒能够感染HEK293T细胞，假病毒颗粒为圆形或椭圆形病毒样结构，直径在150～200 nm之间，并带有G蛋白刺突。HMPV假病毒稀释103倍后Ct值最适于进行核酸检测，并且均一性和稳定性可达到阳性标准品要求。本研究成功构建了含有HMPV N基因全长的假病毒颗粒，可作为核酸检测方法的阳性标准品，实现HMPV核酸提取和核酸检测过程的全程质量控制。
关键词：人偏肺病毒;假病毒;阳性标准品
基金资助：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所青年科学基金（项目号：IVDC-202304）,题目：基于铁蛋白的呼吸道合胞病毒和人偏肺病毒二联纳米颗粒疫苗研究~~
