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作者：张卓;樊剑鸣;滕蔓;张多;刘金玲;郑鹿平;赵东;各思雨;韩放;罗琴;柴书军;罗俊;
单位：郑州大学公共卫生学院;河南省农业科学院动物疫病防控研究所,中英禽病国际研究中心;龙湖现代免疫实验室;河南科技大学动物科技学院,功能微生物与畜禽健康实验室;河南牧业经济学院动物医药学院;
摘要：马立克病（Marek’s disease, MD）是一种严重危害家禽健康养殖的免疫抑制病与肿瘤病，由致病性的血清1型MDV(Marek’s disease virus serotype 1, MDV-1)毒株感染引起。近年来，即使在已接种疫苗的鸡群中，MD病例的发生及危害在全球范围内仍呈不断上升趋势。此前研究发现，经典的MD疫苗已不能很好保护当前流行的MDV特超强毒株，尤其是新出现的特超强MDV(Hypervirulent MDV, HV-MDV)变异株，这意味着新一代高效的MD疫苗亟待研发。本研究中，以近期最新分离鉴定的HV-MDV变异株SDCW01为亲本毒株，首先将其在鸡胚成纤维细胞（Chicken embryo fibroblast, CEF）上连续传代以降低对宿主潜在的免疫抑制性，然后利用基于CRISPR/Cas9系统的基因编辑技术敲除致瘤基因meq，构建meq基因编辑缺失的疫苗候选毒株。经过PCR扩增鉴定、病毒克隆纯化、DNA测序、间接免疫荧光试验（IFA）、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及病毒体外增殖曲线测定等试验，证实获得一株meq基因完全缺失的MDV毒株，命名为SD01△meq。进一步传代培养及PCR鉴定结果显示，SD01△meq传代稳定性良好，meq基因的编辑缺失未发生回复突变，且不影响其它MDV基因的表达及体外复制能力。1日龄SPF鸡攻毒实验结果显示，与亲本毒株SDCW01相比，SD01△meq完全丧失了对宿主的免疫抑制和致病性，其诱导的MD发病率、致死率及肿瘤率均为0%。上述数据表明，本研究成功构建获得了一株meq基因编辑缺失疫苗候选毒株SD01△meq，为后续新型高效MD疫苗的研发奠定了重要基础。
关键词：马立克病病毒;meq基因;CRISPR/Cas9;基因编辑;新型疫苗
基金资助：国家重点研发计划（项目号：2023YFE0106100）,题目：中英禽病防控技术创新联合实验室; 国家自然科学基金（项目号：U21A20260）,题目：鸡马立克病病毒遗传进化与新型疫苗毒株设计的分子基础; 河南省杰出青年科学基金（项目号：232300421009）,题目：家禽免疫抑制病与肿瘤病流行病学研究; 河南省农业科学院自主创新项目（项目号：2024ZC096）题目：鸡马立克病基因缺失疫苗株的表型鉴定和免疫评价~~
