来源：期刊VIP网 时间：
作者：周玉婷;刘睿;王思雯;胡圳圳;郑大同;
单位：南京医科大学第二附属医院儿童医学中心;南京医科大学第二附属医院临床分子检测中心;
摘要：目的 探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)与大鼠小胶质(RM)细胞活化的关系。方法 体外培养RM细胞，并随机分为正常组和氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)组，RT-qPCR检测各组细胞内circHIPK3表达水平。构建具有嘌呤霉素抗性的circHIPK3慢病毒载体，设置过表达(OE)组和阴性对照(NC)组，根据荧光表达强度选择RM细胞最佳感染复数(MOI),采用嘌呤霉素筛选稳定表达circHIPK3的RM细胞。将OE组和NC组细胞置于OGD/R条件下培养，Western blot检测各组细胞中小胶质细胞活化标志蛋白钙结合衔接分子1 (Iba-1)、肿瘤坏死因子受体超家族成员5(CD40)表达水平。通过circRNAdb数据库分析circHIPK3翻译蛋白潜能，利用circBank和Starbase数据库预测circHIPK3潜在结合的微小RNA(miRNA)。结果 与正常组相比，OGD/R组RM细胞中circHIPK3的表达水平显著下调(P<0.000 1)。测序比对结果正确，成功构建circHIPK3过表达慢病毒载体。感染RM细胞最佳MOI=80,以2μg/ml嘌呤霉素筛选得到稳定过表达circHIPK3的RM细胞。RT-qPCR结果显示，OE组细胞中circHIPK3表达水平较NC组显著增高(P<0.01)。Western blot结果显示，在OGD/R培养条件下，OE组细胞中Iba-1和CD40蛋白表达水平较NC组显著降低(P<0.05)。蛋白翻译分析显示，circHIPK3具有2个内部核糖体进入位点(IRES)和1个开放阅读框(ORF),可编码由404个氨基酸组成的多肽。miRNA结合分析显示，circHIPK3可能与8个靶向miRNAs结合：hsa-miR-3529-5p、hsa-miR-379-5p、hsa-miR-506-3p、hsa-miR-33、hsa-miR-450b-5p、hsa-miR-551b-3p、hsa-miR-193、hsa-miR-508-3p。结论 过表达circHIPK3显著抑制OGD/R诱导的RM细胞活化、circHIPK3有编码多肽潜能，可能通过海绵miRNA发挥功能。
关键词：circHIPK3;环状RNA;小胶质细胞;氧糖剥夺/再灌注;慢病毒
基金资助：国家自然科学基金(编号：82371715); 南京医科大学第二附属医院789人才项目(编号：789ZYRC202080235)
