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作者：张煜萱;谢欢;王燕靖;李枫;王国鉴;农蔚霞;刘畅;罗彬;谢小薰;沈宁;张庆梅;
单位：广西医科大学组织学与胚胎学教研室;广西高校区域性疾病基础研究重点实验室;广西医科大学第一附属医院神经外科;广西区人民医院口腔颌面外科;
摘要：目的 研究DNA去甲基化药物联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂对人口腔癌细胞脆性X智障基因1邻近蛋白(FMR1NB)表达及其启动子甲基化的影响，探寻改善FMR1NB表达异质性的方法和策略。方法 DNA甲基化转移酶抑制剂地西他滨(DAC)联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)和丙戊酸(VPA)干预人舌鳞癌细胞株Cal27和SCC-9后，采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、实时定量RT-PCR(qRT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测干预前后FMR1NB的表达变化；焦磷酸测序法检测干预前后FMR1NB启动子甲基化的变化。结果 与空白对照组相比，DAC及其与TSA和VPA联合组均能显著诱导Cal27和SCC-9中FMR1NB mRNA和蛋白的表达。与DAC单独组比较，Cal27中各联合用药组的FMR1NB mRNA表达水平均显著升高，但FMR1NB蛋白表达无明显变化；而SCC-9中除DAC与TSA联合组不能明显提升FMR1NB mRNA表达水平之外，其余各组均能引起FMR1NB mRNA和蛋白水平的显著升高。此外，两株细胞中FMR1NB mRNA和蛋白表达在三药联合组和各两药联合组之间差异均无统计学意义。进一步甲基化测定显示：除SCC-9的三药联合组之外，其余各给药组在两株细胞中FMR1NB启动子区的整体甲基化水平和所测各CpG位点的甲基化水平均有不同程度地降低。结论 DAC及其TSA和VPA联合组普遍可介导FMR1NB启动子去甲基化而增强FMR1NB表达，其中两药联合组的增强表达作用更强。
关键词：口腔癌;FMR1NB;表观遗传学药物;表达;甲基化
基金资助：国家自然科学基金(编号：82260608、81960453、82260554); 广西自然科学基金资助项目(编号：2022GXNSFAA-035639、2018GXNSFAA050058); 广西医科大学大学生创新创业训练计划项目(编号：201910598054)
