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作者：郭文秀;庄妍;张慧灵;何文宁;孟峻;
单位：内蒙古医科大学临床检验诊断教研室;内蒙古医科大学附属医院检验科;
摘要：目的：探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶3 (SGK3)在小鼠卵母细胞第一次减数分裂恢复中的作用，初步阐明SGK3在哺乳动物卵母细胞早期发育中的调控机制。方法：利用超排卵技术获取生发泡（GV）期小鼠卵母细胞，利用显微注射技术将表达质粒体外转录获得的SGK3 mRNA注射至GV期卵母细胞，分为对照组、 Tris-EDTA缓冲液（TE）组和SGK3mRNA组，采用Westernblotting法检测各组小鼠卵母细胞中SGK3蛋白表达水平，显微注射SGK3 mRNA后1、2、3和4 h观察并计算各组卵母细胞生发泡破裂（GVBD）率，采用SGK3抗体稀释抑制实验观察各组卵母细胞形态表现，采用Western blotting法检测体外培养不同时间点卵母细胞中磷酸化SGK3 (pSer48)(SGK3-pSer48)和磷酸化细胞分裂周期蛋白2 (CDC2)(pTyr15)(CDC2-pTyr15)蛋白表达水平。结果：与对照组和TE组比较，SGK3 mRNA组小鼠卵母细胞中SGK3蛋白表达水平升高（P<0.01），显微注射后1和2 h时GVBD率升高（P<0.01）。SGK3抗体稀释抑制实验，随着SGK3抗体浓度增加，各组小鼠卵母细胞GVBD率呈浓度依赖性降低。过表达SGK3后，与对照组比较，SGK3 mRNA组小鼠卵母细胞中检测不到CDC2-pTyr15蛋白表达的时间至少提前1 h。不同稀释浓度SGK3抗体作用后，与对照组比较，随着SGK3抗体浓度升高和时间的延长，小鼠卵母细胞中CDC2-pTyr15蛋白表达水平逐渐降低（P<0.01）, SGK3-pSer486蛋白表达水平逐渐升高（P<0.01）。结论：过表达SGK3可以增加小鼠卵母细胞GVBD率，加快CDC2-pTyr15的脱磷酸化，而CDC2-pTyr15的脱磷酸化晚于SGK3-Ser486的磷酸化。SGK3可能作为CDC2上游调节因子参与调控小鼠卵母细胞第一次减数分裂的恢复。
关键词：血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶3;;小鼠卵母细胞;;减数分裂;;细胞分裂周期蛋白2;;生发泡;;生发泡破裂
基金资助：国家自然科学基金项目（81360109,81660267）;; 内蒙古自治区科技厅自然科学基金项目（2021MS08158）
