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作者：王萌;吴昊;李华;赵艺鸿;金圣宇;
单位：延边大学附属医院血液内科;浙江省绍兴市人民医院康复医学科;延边大学附属医院体检科;延边大学附属医院中心实验室;
摘要：目的：探讨血管性血友病因子裂解酶ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1型13(ADAMTS13)间隔区结构域在血管性血友病因子（vWF）裂解过程中的生物学功能，阐明ADAMTS13在血栓性血小板减少性紫癜（TTP）发病机制中的作用。方法：将ADAMTS13间隔区结构域中的氨基酸残基TEDRLPR以点突变技术逐个基因突变（突变体M1～M7），将构建的ADAMTS13与其突变体质粒转染至人胚肾HEK293细胞，稳定表达后提纯重组蛋白。观察野生型和突变型ADAMTS13在变性条件、剪切应力作用和ADAMTS13抗体处理后裂解vWF的能力。结果：荧光共振能量转移（FRET）实验，与野生型ADAMTS13比较，ADAMTS13突变体M4 (R635A)和突变体M7 (R638A)对FRET-vWF73剪切能力降低（P<0.05）。变性条件下，野生型ADAMTS13可以将vWF多聚体裂解，与野生型ADAMTS13比较，ADAMTS13突变体M4 (R635A)和突变体M7 (R638A)的裂解活性明显降低（P<0.01）。在体外剪切应力作用下，与野生型ADAMTS13比较，ADAMTS13突变体M4 (R635A)和突变体M7 (R638A)裂解vWF多聚体的能力明显降低（P<0.01）。与野生型ADAMTS13比较，ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7 (R638A)与vWF之间的结合力差异无统计学意义（P>0.05），表明ADAMTS13的C末端与vWF之间存在多个结合位点。ADAMTS13抗体处理可在一定程度上抑制野生型和突变型ADAMTS13裂解vWF的能力。结论：间隔区突变后ADAMTS13的活性降低。ADAMTS13突变体M4 (R635A)和突变体M7 (R638A)可能是ADAMTS13在底物识别时的重要作用位点。
关键词：血管性血友病因子裂解酶;;ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1型13;;间隔区结构域;;血管性血友病因子;;血栓性血小板减少性紫癜
基金资助：国家自然科学基金项目（81660026,82060032）;; 吉林省教育厅“十三五”科研项目[吉教科合字（2016273号]
