来源：期刊VIP网 时间：
作者：杨喜善;莫俊;罗庆元;周艳华;张鹏;曾柱;黄文竹;
单位：贵州医科大学生物与工程学院;中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室组织工程与干细胞实验中心;
摘要：建立了高效液相色谱法（HPLC）同时检测细胞基因组中5种去甲基化相关修饰核苷含量的方法。以易位蛋白TET1过表达HEK293T细胞系（HEK293T(TET1CD)）为研究对象，采用DNA Dot Blot法和HPLC法验证过表达TET1细胞中修饰核苷发生的变化。9种核苷在120 min内实现完全分离，且线性关系良好（R~2>0.995），检出限为0.1068～0.5278μmol/L，定量限为0.3236～1.5995μmol/L。HEK293T(TET1CD)细胞经DNA Dot Blot法检测，诱导后细胞基因组中5-羟甲基脱氧胞嘧啶（5hmdC）含量显著升高（P<0.0001）;HPLC检测显示，诱导细胞基因组中5hmdC和5-羟甲基脱氧尿嘧啶（5hmdU）含量升高（P<0.05）, 5-甲基脱氧胞嘧啶（5mdC）含量下降（P<0.05）, 5-甲酰基脱氧胞嘧啶（5fdC）和5-羧基脱氧胞嘧啶（5cadC）未检出。检出样本回收率在100.2%～113.5%之间，相对标准偏差在0.72%～3.0%之间。本研究建立的HPLC方法，能够同时精确检测基因组中5种修饰核苷的含量，能够替代传统的DNA Dot Blot法，为研究去甲基化中的碱基代谢产物提供灵敏、可靠的检测途径。
关键词：高效液相色谱;;5-甲基脱氧胞嘧啶(5mdC);;5-羟甲基脱氧胞嘧啶(5hmdC);;5-羟甲基脱氧尿嘧啶(5hmdU);;同时测定
基金资助：国家自然科学基金(81960036);; 贵州省科技计划项目(黔科合基础-ZK[2021]重点005)资助
