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作者：王灿;韦洁;何俊慧;李冬梅;李懿;蓝艳菊;韦桂宁;黄仁彬;
单位：广西医科大学药学院;广西壮族自治区中医药研究院;广西中医药壮瑶药分子机制研究重点研究室;
摘要：目的:基于网络药理学、分子对接及实验验证探讨香青藤拮抗脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法:通过文献搜索获取香青藤的主要活性成分；借助SwissTargetPrediction预测成分作用靶点；通过GeneCards、DrugBank等数据库获取缺血性脑卒中的相关靶点；导入STRING平台及Cytoscape 3.8.0软件构建蛋白互作网络与“成分-交集靶点”网络，通过DAVID6.8数据库进行GO功能和KEGG通路富集分析，AGFR软件进行分子对接验证。构建大鼠MCAO脑缺血再灌注模型，通过TTC染色、神经学行为评分、HE染色及尼氏染色评估香青藤提取物对脑缺血的改善作用，Western blot法检测缺血脑皮层中核心靶点蛋白表达。结果:经筛选获得香青藤活性成分23个，拮抗脑缺血的潜在靶标186个。GO分析结果显示香青藤拮抗脑缺血的关键靶点主要集中在血管内皮细胞迁移的积极调节等生物过程，血红素结合等分子功能。KEGG富集分析显示香青藤可能通过调控VEGF、HIF-1、TNF、PI3K-AKT等信号通路调节血管生成、炎症、凋亡等过程，其发挥拮抗脑缺血作用的潜在主要活性成分是：无根藤辛、甘草素、illigerate C、illigerate A、illigerate F、illigerate G。分子对接结果证明illigerate F、甘草素等成分与核心靶点ERK1、TNF等有较强的结合能力。动物实验结果显示，与正常对照组相比，模型对照组神经行为学评分和脑梗死面积显著增加，缺血皮质神经细胞坏死、胞核固缩，神经元数量减少(P<0.01),缺血区TNF-α表达及其下游ERK1/2的磷酸化表达和Cleaved Caspase3表达上调，HIF-1α、EPO蛋白表达下调(P<0.01);与模型对照组相比，香青藤提取物脑缺血再灌注(CIR)大鼠行为学评分显著改善、脑梗死面积降低，缺血脑皮质组织损伤有效改善，TNF-α、Cleaved Caspase3表达及ERK1/2的磷酸化表达明显下调，缺血区HIF-1α、EPO蛋白表达上调(P<0.05或P<0.01)。结论:基于网络药理学筛选与体内实验探究发现香青藤通过靶向TNF-α及HIF-1α通路，抑制凋亡和炎症，进而减轻脑缺血再灌注损伤。
关键词：香青藤;;缺血性脑卒中;;脑缺血再灌注损伤;;网络药理学;;肿瘤坏死因子-α;;缺氧诱导因子-1α
基金资助：广西自然科学基金(编号：2023GXNSFBA026267);; 国家自然科学基金(编号：82104443);; 广西中医药重点学科建设项目(编号：GZXK-Z-20-75)
