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作者：张鼎;周珂青;孙春英;秦红玲;陈炜;胡跃强;
单位：广西中医药大学研究生院;广西中医药大学第一附属医院脑病一科;
摘要：目的：基于PDK2/PDH-Nrf2信号轴调控糖酵解和氧化损伤途径，探讨温肺降浊方含药血清对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤HT22细胞的影响及分子机制。方法：通过OGD/R诱导HT22细胞复制血管性痴呆模型，设立正常对照组、模型组、DCA(丙酮酸脱氢酶激酶抑制剂)组和温肺降浊方含药血清组。CCK-8检测OGD处理HT22细胞最佳时间点及不同温肺降浊方含药血清对HT22细胞的最佳干预浓度和时间点；检测各组细胞内耗氧率和细胞外酸化率；ROS荧光标记各组细胞活性氧表达；免疫荧光双标观察细胞内PDK2、PDH阳性细胞表达；qRT-PCR和Western Blot分别检测各组细胞内PDK2/PDH-Nrf2信号轴mRNA和蛋白表达。结果：OGD处理HT22细胞2 h、20%温肺降浊方含药血清干预24 h为最佳适合条件。与正常对照组比较，模型组细胞最大耗氧率、活性氧水平和PDK2阳性表达显著升高，最大酸化率和PDH阳性表达显著降低，PDK2 mRNA和蛋白及p-PDK2蛋白表达显著升高，PDH、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较，DCA组和温肺降浊方含药血清组细胞最大耗氧率、活性氧水平和PDK2阳性表达显著降低，最大酸化率和PDH阳性表达显著升高，PDK2 mRNA和蛋白及p-PDK2蛋白表达显著降低，PDH、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论：温肺降浊方含药血清可通过提高细胞有氧糖酵解能力，抑制线粒体氧化磷酸化，减少神经元细胞过度死亡，其机制可能与PDK2/PDH-Nrf2信号轴的激活有关。
关键词：温肺降浊方;;氧化损伤;;氧糖剥夺/复氧;;糖酵解;;PDK2/PDH-Nrf2轴;;分子机制
基金资助：国家自然科学基金项目(82260904);; 国家中医药管理局高水平重点学科-中医内科学(ZYYZDXK-2023166);; 广西中医药大学“桂派杏林拔尖人才”计划(04B2300807,04B2300907);广西中医药大学“岐黄工程”高层次人才团队(202410);广西中医药大学博士研究生创新项目(YCBXJ2023010);; 广西中医药重点学科建设项目(GZXK-Z-20-13)
