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作者：陈柳萍;明如宏;覃春梅;黄鼎;黄荣韶;姚绍嫦;
单位：广西中医药大学药学院/广西高校中药民族药资源保护与利用重点实验室;
摘要：目的：构建高质量的牛大力核体系Gateway酵母文库，并通过酵母双杂交获得牛大力CsMYB36的互作蛋白。方法：以牛大力的根、茎、叶为材料，利用Gateway技术构建核体系酵母文库，并对初级文库与次级文库的质量进行鉴定；构建重组质粒并转化酵母，通过酵母双杂交方法进行CsMYB36互作蛋白的筛选鉴定。结果：分别构建了库容量为3.6×10~6与3.0×10~6 CFU/mL的初级文库与核体系次级文库，并构建了文库滴度为7.00×10~7 cells/mL的酵母文库，重组率均为100%,平均长度>1 000 bp;构建了pGBKT7-CsMYB36重组载体并共转进酵母感受态，转化效率为6.28×10~4/μg,经检测CsMYB36不存在自激活；通过酵母双杂交核文库筛选获得了64个与CsMYB36相互作用的蛋白，包括3-磷酸甘油醛脱氢酶、半乳糖基转移酶等参与蔗糖代谢的蛋白，SUI1等参与赤霉素(GAs)合成或代谢途径的蛋白，NAC、WRKY等参与次生代谢的转录因子蛋白等。结论：本研究成功构建了牛大力的核体系酵母文库，且成功鉴定出CsMYB36的互作蛋白，可为后续开展牛大力功能基因筛选和基因功能验证奠定基础。
关键词：牛大力;;CsMYB36;;酵母双杂交;;互作蛋白
基金资助：国家自然科学基金项目(82060685);; 广西自然科学基金项目(2022GXNSFAA035497)
