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作者：陈请国;褚汉启;陈金;刘云;杜智会;周良强;
单位：华中科技大学同济医学院附属同济医院耳鼻咽喉头颈外科;
摘要：目的 探究质膜钙泵1(plasma membrane calcium pumps1,PMCA1)和PMCA3在发育期大鼠耳蜗毛细胞的动态表达。方法 麻醉后取出生2(P2)、6(P6)、13(P13)、21(P21) d的大鼠耳蜗，固定后分离出基底膜做铺片，通过定量免疫荧光标记法检测PMCA1和PMCA3在基底膜底回、中回、顶回外毛细胞(outer hair cells,OHCs)和内毛细胞(inner hair cells,IHCs)的表达部位和表达水平。用共聚焦显微镜捕获免疫荧光图片，使用Adobe Photoshop软件测量PMCA1和PMCA3的荧光强度，绘制年龄相关性表达曲线。结果 在整个发育过程中，PMCA1在OHCs纤毛(OHCs hair bundle,OHCs-HB)、IHCs纤毛(IHCs hair bundle,IHCs-HB)均无表达。在出生早期，PMCA1在OHCs胞体(OHCs cell body,OHCs-CB)、IHCs胞体(IHCs cell body,IHCs-CB)侧膜的表达逐渐增强，P6后在OHCs-CB侧膜的表达逐渐下降，到成年期维持在微弱的水平；PMCA1在IHCs-CB侧膜的表达在P13达到高峰，维持在此水平进入成年期。在整个发育阶段，PMCA3在OHCs-HB、IHCs-HB均无表达，在出生6 d内的OHCsCB、IHCs-CB侧膜均有较强的表达。P13后，PMCA3在OHCs-CB侧膜表达几乎消失，在IHCs-CB侧膜和表皮板下方项圈的表达虽然下降，但仍维持在一定水平进入成年期。P2、P6,PMCA1、PMCA3在OHCs-CB、IHCs-CB侧膜表达水平在基底膜底回最高，其次为中回、顶回，P13后，差异性消失。结论 在大鼠发育过程中，PMCA1、PMCA3在毛细胞不同部位呈现动态表达，PMCA1、PMCA3在OHCs-HB、IHCs-HB均无表达，在出生早期的OHCs-CB侧膜有短暂的表达，在整个时期的IHCs-CB侧膜持续表达。由于毛细胞主要依靠PMCA来调控胞内Ca~(2+)水平，因此推测PMCA1和PMCA3在毛细胞的差异性表达与PMCA泵在毛细胞不同区域发挥着特殊的功能有关。
关键词：质膜钙泵1;;质膜钙泵3;;大鼠;;耳蜗;;毛细胞;;动态表达
基金资助：国家自然科学基金青年基金项目(81300827);; 湖北省自然科学基金面上项目(2023AFB686,2022CFB282)
