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作者：赵俊柯;谢芝勋;余丹;张艳芳;谢志勤;范晴;尹文巧;杨冰怡;黄青红;喻华英;
单位：广西大学动物科学技术学院;广西壮族自治区兽医研究所农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室/广西兽医生物技术重点实验室;
摘要：为了能快速鉴别B亚型禽偏肺病毒(Avian metapneumovirus B,aMPVB)与其他禽类常见病毒，试验基于aMPVB F基因的保守区域设计一套特异性环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplilication, LAMP)引物，包括外引物F3和B3,内引物FIP(F1c+F2)和BIP(B1c+B2),环引物Floop和Bloop,其中FIP的5′端用淬灭基团BHQ2标记，同时在F3、B3之间引入1条探针FD,其3′端用CY5荧光基团标记，建立可视化荧光RT-LAMP方法，对该方法进行反应条件优化及特异性、敏感性检测，并利用该方法对临床样品进行检测。结果表明：建立的可视化荧光RT-LAMP方法的最佳探针复合物浓度为0.32μmol/L,最佳反应温度为63℃;该方法仅能检测到aMPVB,其他17种禽类常见病毒均呈阴性；对aMPVB的最低检出限为1.2×10~(2 )copies/μL,敏感性是普通PCR方法(1.2×10~(3 )copies/μL)的10倍。该方法的反应时间为60 min,约为普通PCR方法的一半，大大提高了检测效率。利用该方法对采自广西地区的23份临床样本进行检测，结果与普通PCR方法完全一致。说明该方法能够快速、准确地检测aMPVB,特异性好，敏感性高，具有良好的实际应用价值。
关键词：禽偏肺病毒;;荧光RT-LAMP;;可视化;;FD探针;;检测方法
基金资助：广西科技基地和人才专项(桂科AD17195083);; 广西兽医生物技术重点实验室自主研究项目(24-035-32-A-01);; 广西农业科技创新联盟项目(202409-01);; 广西八桂学者专项(2019A50)
