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作者：张锋宛;刘琳;刘明洋;常晶晶;张瀚文;高亚茹;王泱;张宜娜;李新生;宋亚鹏;
单位：河南农业大学动物医学院;南京农业大学动物医学院;
摘要：为了建立一种高效的血清8b型禽腺病毒(FAdV-8b)检测方法，试验针对FAdV-8b Hexon基因高度保守区的核苷酸序列设计TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的特异性引物和探针，通过对扩增体系进行优化建立了FAdV-8b的TaqMan荧光定量PCR检测方法，对该方法进行特异性、敏感性和重复性检测，并采用该方法对FAdV-8b感染SPF鸡进行排毒监测与临床样品检测。结果表明:优化后的扩增体系为模板2μL、Premix Ex Taq~(TM)(Probe qPCR)10μL、上下游引物(TaqMan-F/R,10μmol/L)各0.4μL、探针(P,10μmol/L) 0.8μL。该方法能特异性检出FAdV-8b，与血清8a型禽腺病毒(FAdV-8a)、血清2型禽腺病毒(FAdV-2)、血清11型禽腺病毒(FAdV-11)、血清4型禽腺病毒(FAdV-4)、鸡传染性贫血病毒(CIAV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)和H9N2亚型禽流感病毒无交叉反应;能检测到的最低质粒拷贝浓度为50拷贝/μL，敏感性是常规PCR方法的10倍;以拷贝浓度0.5×10~7,0.5×10~6,0.5×10~5,0.5×10~4拷贝/μL的阳性标准质粒为模板的3次重复Ct值的变异系数分别为1.17%、3.73%、6.25%、2.56%。采用该方法进行排毒监测，于攻毒后第1～14天均可在SPF鸡泄殖腔拭子中检测到病毒且于攻毒后第1天和第2天对病毒的检出率达到100%(10/10)，而常规PCR方法仅可于攻毒后第1～12天检测到病毒且于攻毒后第1天和第2天对病毒的检出率较低;该方法对91份疑似禽腺病毒感染的临床样本的检出率为13.1%(8/61)，与常规PCR方法的符合率为96.7%。说明本研究建立的FAdV-8b TaqMan实时荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好，可用于临床上FAdV-8b的快速检测。
关键词：禽类;;血清8b型禽腺病毒;;Hexon基因;;TaqMan探针;;实时荧光定量PCR;;检测方法
基金资助：河南省科技攻关项目(232102110083);; 河南省揭榜挂帅科技资助项目(211110111000);; 河南省高等学校重点科研项目(23B230002)
