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作者：王旭;刘德凯;赵碧田;黄泽楷;李海名;张彦龙;
单位：东北林业大学野生动物与自然保护地学院;
摘要：为探究黑龙江省某水貂养殖场幼貂发生疑似水貂震颤综合征(shaking mink syndrome,SMS)继发死亡的病原并针对病原建立特异性强、灵敏度高的检测方法，试验首先采集3只病死幼貂的脑、肝脏、肾脏和肺脏组织标本，经H.E．染色制作成病理切片进行组织病理学观察，采用RT-PCR方法对水貂常见病原[星状病毒(Astrovirus,AstV)、犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)、阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)]进行检测，并对检测的病原进行遗传进化分析;然后建立针对病原建立半巢式RT-PCR检测方法，对建立的方法进行条件(退火温度、Taq酶体积、引物体积)优化、特异性试验、敏感性试验、重复性试验，并采用该方法对119份病死幼貂的脑组织样本进行检测。结果表明:病死水貂大脑-皮质内部分神经细胞变性、坏死，皮质内部分血管周围有炎性细胞浸润，出现管套现象，皮质内胶质细胞散在性浸润，与神经毒性AstV引起的特征性病理变化相似;其他组织未见明显病理变化。从病死幼貂脑组织中仅检测到AstV，命名为SMS-AstV-Harbin。从基于AstV ORF1b基因构建的遗传进化树中可见，SMS-AstV-Harbin与Mink astrovirus isolate-SMS-AstV(登录号为GU985458.1)处于同一小分支，亲缘关系较近;与Human astrovirus UK1(登录号为KM358468.1)、Canine astrovirus strain HUN/2012/8(登录号为KX599354.1)、Feline astrovirus2(登录号为KF499111.1)、Porcine astrovirus 3 strain NI-Brain/173-2016a/HUN(登录号为KY073231.1 )、Bovine astrovirus CH13(登录号为KM035759.1)、Ovine astrovirus 2(登录号为NC＿002469.1)处于不同小分支，亲缘关系较远。建立的半巢式RT-PCR检测方法的最优退火温度、Taq酶(5 U/μL)体积和引物(10μmol/L)体积分别为52℃、0.5μL和1μL。该方法能特异性地检出SMS-AstV，其c DNA最低检测限为1 pg/μL，且对3份样本的3次重复检测结果均一致。采用该方法检出SMS-AstV阳性样本117份，阳性率为98.32%。说明引起该养殖场幼貂死亡的病原为SMS-AstV，针对该病原建立的半巢式RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好，可用于快速检测。
关键词：水貂震颤综合征;;水貂星状病毒;;病理学观察;;病毒鉴定;;遗传进化分析;;半巢式RT-PCR方法
基金资助：中央高校基本科研业务费专项资金项目“应用抗体对产志贺毒素大肠杆菌的保护效果研究”(43219024)
