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作者：陈晶;魏书宇;郭轶彤;万心情;周嘉成;王敏;王北艳;马金柱;
单位：黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院;
摘要：为了提高金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)凝集因子ClfA_(221～550)蛋白的免疫原性，试验以180只6～8周龄健康的雌性昆明小鼠为研究对象，将获得的ClfA_(221～550)蛋白分别与Mn~(2+)(MnCl_2)、氢氧化铝[Al(OH)_3,AH]和CpG佐剂单独混合或者与其中2种佐剂或者3种佐剂共同混合，制备含不同佐剂的免疫原，试验共分9组，每组20只，磷酸盐缓冲液(PBS)组、ClfA_(221～550)组、ClfA_(221～550)+Mn~(2+)组、ClfA_(221～550)+AH组、ClfA_(221～550)+CpG组、ClfA_(221～550)+Mn~(2+)+AH组、ClfA_(221～550)+Mn~(2+)+CpG组、ClfA_(221～550)+AH+CpG组、ClfA_(221～550)+Mn~(2+)+AH+CpG组分别免疫PBS、ClfA_(221～550)、ClfA_(221～550)+Mn~(2+)、ClfA_(221～550)+AH、ClfA_(221～550)+CpG、ClfA_(221～550)+Mn~(2+)+AH、ClfA_(221～550)+Mn~(2+)+CpG、ClfA_(221～550)+AH+CpG、ClfA_(221～550)+Mn~(2+)+AH+CpG。免疫部位为小鼠后腿肌肉，每只小鼠接种剂量为ClfA_(221～550)蛋白50μg,Mn~(2+)140μg,AH 200μg,CpG10μg，用PBS定容至100μL接种，免疫2次，免疫间隔时间为2周。第2次免疫后第7天和第14天分别采用ELISA方法检测小鼠血清中细胞因子和ClfA_(221～550)抗体的水平;采用调理吞噬试验评价抗体的调理作用;第2次免疫后第7天采用淋巴细胞增殖试验评价脾淋巴细胞活化情况;第2次免疫后第14天用S.aureus Newman菌株感染小鼠进行细菌负载试验和攻毒试验，检测免疫原对小鼠的免疫保护效果。结果表明:ClfA_(221～550)+Mn~(2+)+AH+CpG组OD_(450)值、S.aureus的菌落数、淋巴细胞刺激指数(SI)均最高，显著高于其他组(P<0.05); γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10，除ClfA_(221～550)+Mn~(2+)+CpG组、ClfA_(221～550)+AH+CpG组外)和白细胞介素-17(IL-17，除ClfA_(221～550)+Mn~(2+)+CpG组外)质量浓度最高，显著高于其他组(P<0.05);小鼠脾脏、肝脏和肾脏的细菌负载量均最小，显著低于其他组(P<0.05)。S.aureus Newman菌株攻毒后第14天，ClfA_(221～550)+Mn~(2+)+AH+CpG组小鼠存活率最高，明显高于其他组。说明Mn~(2+)、AH、CpG组成联合佐剂能通过协同效应显著增强ClfA_(221～550)蛋白免疫原性，提高ClfA_(221～550)蛋白引起的细胞免疫和体液免疫水平，增强ClfA_(221～550)对S.aureus抗感染免疫保护作用。
关键词：ClfA_(221～550)蛋白;;Mn~(2+);;CpG;;氢氧化铝;;联合佐剂;;免疫原性
基金资助：黑龙江省大学生创新创业训练计划项目(202110223005;202110223007);; 黑龙江八一农垦大学研究生创新科研项目(YJSCX2023-Y64)
