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作者：王敏之;吴苏君;刘嘉;马驰骋;宋菲菲;王宏浩;李希;王曦;
单位：山西农业大学动物科学学院;
摘要：为了验证谷氨酸(Glu)通过PI3K/AKT/m TOR信号通路调控奶公犊牛小肠上皮细胞活性的机制，试验先建立奶公犊牛小肠上皮细胞体外培养模型，将第4代奶公犊牛小肠上皮细胞分为5组，其中4个试验组分别用不同浓度(10,20,25,30,50 mmol/L) Glu的DMEM完全培养基进行培养，1个对照组(NC组)用不添加Glu的DMEM完全培养基培养，每组6个重复，培养24 h后，采用CCK-8法检测各组细胞活性，并筛选Glu最佳添加浓度。测定Glu最佳添加浓度处理组和NC组细胞的活性氧(ROS)含量，并利用实时荧光定量PCR和Western-blot检测谷氨酸转运蛋白(EAAT3)、PI3K/AKT/m TOR信号通路相关基因(PI3K、AKT、m TOR、FOXO1、S6K1、c-myc)和凋亡相关基因(Bax、Bcl-2、Caspase-3)的mRNA相对表达量及关键蛋白表达水平。结果表明:通过Ⅰ型胶原酶和Ⅰ型中性酶联合消化法和相差消化贴壁法成功建立奶公犊牛小肠上皮细胞的体外培养模型。添加25 mmol/L Glu培养的奶公犊牛小肠上皮细胞的活性和生长状态最佳。与NC组相比，25 mmol/L Glu组细胞的ROS含量显著增加(P<0.05); EAAT3、PI3K、AKT、Bcl-2、m TOR、FOXO1、S6K1、c-myc基因的mRNA相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),Bax、Caspase-3基因的mRNA相对表达量及Bax/Bcl-2均显著降低(P<0.05); EAAT3、AKT蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),PI3K、m TOR蛋白相对表达量极显著升高(P<0.01)。说明25 mmol/L Glu对体外培养的奶公犊牛小肠上皮细胞增殖活动具有促进作用。
关键词：谷氨酸;;奶公犊牛;;小肠上皮细胞;;PI3K/AKT/mTOR信号通路;;活性
基金资助：山西省青年科学基金项目(20210302124640);; 山西省科技重大专项(202201140601026-1);; 山西现代农业产业技术体系建设项目(2024CYJSTX13-04)
