来源：期刊VIP网 时间：
作者：张昊;刘浩;崔海霞;高娃;张丽丽;吕志远;王文龙;
单位：内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室;巴彦淖尔市临河区动物疫病预防控制中心;河套学院医学系/内蒙古自治区蜱媒人畜共患传染病重点实验室;
摘要：为了解决布鲁氏菌疫苗株与野毒株鉴别困难的技术难题，试验采用全基因组序列比对分析的方法，对布鲁氏菌S2疫苗株与布鲁氏菌1330野毒株进行比对，筛选一段S2疫苗株缺失基因，通过结合布鲁氏菌通用抗原BP26基因设计2对特异性引物，建立了一种能够区分S2疫苗株与其他菌株的双重PCR检测方法，并对该方法进行敏感性、特异性和重复性试验，同时应用该方法对84份临床样品进行检测，计算符合率。结果表明:在试验建立的双重PCR检测方法中，S2疫苗株因缺失靶序列仅显示单一BP26条带，而野毒株及其他疫苗株(Rev.1、A19等)呈现双条带(BP26基因条带与S2疫苗株缺失片段条带)。该检测方法最佳引物浓度为6μmol/L，退火温度为54℃，退火时间为30 s，延伸时间为45 s，共35次循环，最低检测限为7.536×10~(-5)ng/μL，与大肠杆菌、链球菌无交叉反应，具有良好的重复性。用本试验建立的双重PCR检测方法检测临床样品84份，布鲁氏菌阳性率为61.9%(52/84)，其中S2疫苗株阳性率为40.5%(34/84)，与实时荧光定量PCR方法检测结果的符合率为96.4%(81/84)。说明本试验建立的鉴别布鲁氏菌S2疫苗株与其他菌株的双重PCR检测方法兼具高特异性和敏感性，可用于临床样品布鲁氏菌的检测。
关键词：布鲁氏菌病;;S2疫苗株;;野毒株;;双重PCR;;基因缺失
基金资助：内蒙古一流学科科研专项(YLXKZX-NND-012);; 内蒙古农业大学硕士研究生科研创新项目
