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作者：房恩岳;常宇桐;何畦嘉;胡孔新;
单位：中国质量检验检测科学研究院;
摘要：慢病毒载体因其在多种分裂和非分裂细胞中高效稳定表达的优势，已成为细胞和基因治疗领域的重要工具，但其在临床应用中可能因同源或非同源重组产生复制型慢病毒（Replication-competent lentivirus,RCL），带来潜在安全性风险。本研究通过反向遗传学技术对HIV-1 NL4-3株进行改造，删除辅助蛋白基因（Vif、Vpr、Vpu和Nef），并插入NanoLuc荧光报告基因，成功构建了遗传稳定的HIV弱毒株NL4-3-dA-NLuc。HIV-1 p24抗原检测、滴度测定及病毒基因组测序结果均显示病毒拯救成功。进一步研究结果表明，该弱毒株保留了母本病毒的CXCR4感染嗜性，但复制能力显著降低。在连续传5代后病毒基因组未突变，表现出良好遗传稳定性，且传代细胞可见明显细胞病变效应，可稳定检测到HIV-1 p24抗原及NanoLuc报告基因表达。RCL检测感染灵敏度验证实验显示，NL4-3-dA-NLuc株作为阳性对照病毒的RCL最低检测限为5TCID_(50)。本研究为RCL检测方法的优化提供了一种遗传稳定且定量灵敏的阳性对照病毒，为基因治疗产品的安全性评估提供了重要技术支持，有望推动国内RCL检测技术的规范化和广泛应用。
关键词：慢病毒载体;;复制型慢病毒;;感染性克隆;;嵌合抗原受体T细胞
基金资助：中国质检院基本科研业务费项目（项目号：2024JK023），题目：市场监管领域生物安全风险监测与预警支撑研究;中国质检院基本科研业务费项目（项目号：2023JK004），题目：关于复制型慢病毒检测用HIV弱毒株构建的研究~~
