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作者：刘光华;傅文;吴贻森;王孟雨;高静;武莉华;王子华;史栋梁;
单位：河南中医药大学第一附属医院风湿病科;南京中医药大学附属南京中医院针灸科;河南中医药大学骨伤学院;湖北中医药大学针灸骨伤学院;河南中医药大学康复医学院;
摘要：目的：观察“疏肝调神”针刺对慢性炎性痛与抑郁共病（CIPDC）大鼠海马神经元线粒体自噬和氧化应激相关因子的影响及对海马神经元的保护作用，探讨“疏肝调神”针刺改善CIPDC的可能机制。方法：从60只SD大鼠中随机取12只作为对照组，余大鼠采用左后足趾面皮下注射完全弗氏佐剂的方法构建CIPDC模型，将造模成功的48只大鼠分为模型组、电针组、抑制剂组、电针+抑制剂组，每组12只。电针组大鼠予电针干预，穴取“印堂”“百会”及双侧“合谷”“太冲”，合谷、太冲连接电针（同侧穴位为1组，选用疏密波、频率2 Hz/10 Hz、电流1 mA），每日30 min；抑制剂组大鼠予自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）腹腔注射；电针+抑制剂组大鼠予腹腔注射3-MA后再予电针干预。均每日1次，持续14 d。采用机械刺激缩足反射阈值（PWMT）、热缩足反射潜伏期（PTWL）评价大鼠疼痛阈值；糖水偏好实验、旷场实验、强迫游泳评价大鼠抑郁样行为；HE染色观察大鼠海马神经元形态；Fluoro-Jade B染色观察大鼠海马神经元损伤变性情况；透射电镜观察大鼠海马神经元线粒体超微结构；流式细胞术检测大鼠海马组织活性氧（ROS）含量；比色法检测大鼠海马组织丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量；Western blot法检测大鼠海马组织隔离体蛋白1(p62)、PTEN诱导的假定激酶1(PINK1)、帕金蛋白（Parkin）、苄氯素1(Beclin1)、微管相关蛋白1A/1B轻链3(LC3)蛋白表达；实时荧光定量PCR法检测大鼠海马组织p62、PINK1、Parkin、Beclin1 mRNA表达。结果：与对照组比较，模型组大鼠PWMT、PTWL及蔗糖偏好率、运动总距离、中心区域运动时间降低（P<0.05），漂浮时间升高（P<0.05）；海马神经元排列松散，核膜破裂，变性神经元数量增加（P<0.05）；线粒体破裂肿胀、内部嵴断裂或消失；ROS、MDA含量升高（P<0.05）,SOD含量降低（P<0.05）；海马组织p62、PINK1、Parkin、Beclin1蛋白及mRNA表达和LC3蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。与模型组比较，电针组大鼠PWMT、PTWL及蔗糖偏好率、运动总距离、中心区域运动时间升高（P<0.05），漂浮时间降低（P<0.05）；海马神经元形态圆润，排列整齐，变性神经元数量减少（P<0.05）；线粒体形态较为正常，双层膜结构较为完整，可见自噬小体出现；ROS、MDA含量降低（P<0.05）,SOD含量升高（P<0.05）；海马组织p62蛋白及mRNA表达降低（P<0.05）,PINK1、Parkin、Beclin1蛋白及mRNA表达升高（P<0.05）,LC3蛋白表达升高（P<0.05）。与电针组比较，电针+抑制剂组大鼠PWMT、PTWL及蔗糖偏好率、运动总距离、中心区域运动时间降低（P<0.05），漂浮时间升高（P<0.05）；海马神经元排列更紊乱，核膜损伤增加，变性神经元数量增加（P<0.05）；线粒体双层膜及嵴损伤明显；ROS、MDA含量升高（P<0.05）,SOD含量降低（P<0.05）；海马组织p62蛋白及mRNA表达升高（P<0.05）,PINK1、Parkin、Beclin1蛋白及mRNA表达降低（P<0.05）,LC3蛋白表达降低（P<0.05）。结论：“疏肝调神”针刺可能通过调控PINK1/Parkin信号通路增强海马神经元线粒体自噬发挥对CIPDC大鼠的保护作用。
关键词：慢性炎性痛;;抑郁;;共病;;“疏肝调神”针刺;;线粒体自噬;;海马神经元;;PINK1/Parkin信号通路
基金资助：河南省科技研发计划联合基金项目：242301420089;; 河南省中医药科学研究专项课题项目：2022JDZX105;; 国家自然科学基金资助项目：82305417;; 河南省科技攻关项目：232102311217
