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作者：张鑫铭;刘章铭;杨海军;潘威;徐华洲;马惠荣;杜惠兰;李文雅;宋翠淼;
单位：河北中医药大学中西医结合学院;河北中医药大学河北省中西医结合肝肾病证研究重点实验室;河北中医药大学第一附属医院;河北省中西医结合生殖疾病协同创新中心;
摘要：目的:借助3D体外共培养模型探讨补肾调经方含药血清经人子宫内膜基质细胞(HESC)、缺氧诱导因子2α(HIF-2α)介导途径调控人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8)侵袭的作用及机制。方法:采用CCK-8法筛选出补肾调经方大鼠含药血清最佳浓度。使用分化混合物体外诱导HESC蜕膜化。将蜕膜化的HESC与HTR-8形成的人滋养细胞胚泡样球体(BLS)共培养，建立3D体外共培养模型。在缺氧条件下，利用特异性siRNA靶向敲低蜕膜化HESC中HIF-2α,以补肾调经方含药血清干预蜕膜化的HESC,收集蜕膜化HESC条件培养基刺激HTR-8。实验分为正常对照血清组、10%补肾调经方含药血清组、阴性对照组、siRNA-HIF-2α组和siRNA-HIF-2α+10%补肾调经方含药血清组。3D体外共培养模型观察补肾调经方含药血清对BLS迁移能力与侵袭能力的影响；ELISA法检测HESC条件培养基中血管内皮生长因子(VEGFA)含量；Western blot和RT-qPCR法分别检测蜕膜化HESC中HIF-2α及下游分子赖氨酸氧化酶(LOX)、VEGFA蛋白及mRNA表达，HTR-8中存活信号磷酸肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶(p-AKT)及侵袭信号表皮生长因子结构域7(EGFL7)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、NOTCH1蛋白及其mRNA表达。结果:与正常对照血清组比较，13.5 g/kg补肾调经方10%含药血清组24、48 h BLS的类胎盘绒毛延伸范围扩大，迁移直径扩大(P<0.05),蜕膜化HESC中HIF-2α、LOX和VEGFA蛋白及mRNA表达明显上调(P<0.05或P<0.01),条件培养基中VEGFA含量显著增加(P<0.01),HTR-8中PI3K、p-AKT、EGFL7、MAPK、NOTCH1蛋白及其mRNA表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与阴性对照组比较，siRNA-HIF-2α组24、48 h BLS的类胎盘绒毛延伸范围较小，迁移直径减小(P<0.05),黏附率显著降低(P<0.01),蜕膜化HESC中HIF-2α、LOX和VEGFA蛋白及mRNA表达明显下调(P<0.05或P<0.01),条件培养基中VEGFA含量显著减少(P<0.01),HTR-8中PI3K、p-AKT蛋白及其mRNA表达明显下调(P<0.05或P<0.01);与siRNA-HIF-2α组比较，siRNA-HIF-2α+13.5 g/kg补肾调经方10%含药血清组24、48 h BLS的类胎盘绒毛延伸范围扩大，迁移直径显著扩大(P<0.01),黏附率显著提高(P<0.01),蜕膜化HESC中HIF-2α、LOX和VEGFA蛋白及mRNA表达明显上调(P<0.05或P<0.01),条件培养基中VEGFA含量显著增加(P<0.01),HTR-8中PI3K、p-AKT蛋白及其mRNA表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。结论:补肾调经方含药血清可能通过蜕膜化HESC中HIF-2α/LOX/VEGFA通路激活HTR-8的存活信号PI3K/AKT,并增强HTR-8的侵袭信号EGFL7/MAPK/NOTCH1的表达，从而促进HTR-8的迁移与侵袭。
关键词：补肾调经方含药血清;;3D体外共培养模型;;缺氧诱导因子2α;;人子宫内膜基质细胞;;人绒毛膜滋养层细胞;;基质-滋养层细胞对话;;侵袭
基金资助：国家自然科学基金面上项目(编号：82174419);; 河北省自然科学基金项目(编号：H2020423077);; 河北省中医药管理局重点项目(编号：Z2022001)
