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作者：曹策;辛高杰;刘子馨;张会雨;陈原原;郭帆;彭涵;李磊;付建华;刘建勋;
单位：中国中医科学院西苑医院基础医学研究所,中药药理北京市重点实验室,国家中医心血管疾病临床医学研究中心;
摘要：目的:观察丹参酮ⅡA促进氧糖剥夺/再复(OGD/R)损伤后H9C2心肌细胞再生作用机制。方法:H9C2细胞分为空白对照组、模型对照组(OGD/R)和丹参酮ⅡA 10、20、40μmol/L组；CCK-8法筛选丹参酮ⅡA对OGD/R损伤H9C2心肌细胞的保护浓度；试剂盒检测丹参酮ⅡA对乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌酸激酶(CK)的影响；免疫荧光观察H9C2细胞EdU的增殖情况；划痕试验检测H9C2细胞的伤口愈合能力；转录组高通量测序探索丹参酮ⅡA对OGD/R损伤后H9C2心肌细胞再生机制；分子对接检测丹参酮ⅡA和差异蛋白的结合情况；Real-time PCR法验证差异基因Ccnd1/Plk1/Ccne2的mRNA的相对表达。结果:与OGD/R组比较，丹参酮ⅡA 10、20、40μmol/L组可以减轻OGD/R对H9C2心肌细胞带来的损伤，降低LDH、CK、CK-MB活力(P<0.01),促进心肌细胞再生和伤口愈合(P<0.05或P<0.01)。转录组测序筛选出差异基因623个；GO和KEGG富集分析结果显示，丹参酮ⅡA回调差异基因主要影响蛋白质折叠(protein folding)、核糖核蛋白复合体(ribonucleoprotein complex)、未折叠蛋白质结合(unfolded protein binding)等生物进程和内质网中的蛋白质加工(protein processing in endoplasmic reticulum)、FoxO信号通路(foxO signaling pathway)、细胞周期(cell cycle)等信号通路；分子对接结果显示，丹参酮ⅡA与核心差异蛋白的结合能均<6 kcal/mol;核心差异基因Ccnd1/Plk1/Ccne2 mRNA的相对表达与转录组测序结果一致。结论:丹参酮ⅡA可以介导CCND1/PLK1/CCNE2调节细胞周期，促进OGD/R损伤后H9C2心肌细胞再生。
关键词：丹参酮ⅡA;;细胞周期;;心肌细胞再生;;OGD/R模型;;周期蛋白/Polo样激酶Ⅰ/同期蛋白E1
基金资助：国家自然基金重点资助项目(编号：82030124、82174015);; 中国中医科学院西苑医院能力提升项目(编号：XYZX0303-03);; 中国中医科学院科技创新工程(编号：CI2021A04609)
