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作者：万冉;程俞梦;程思远;江宇航;赵帅军;赵鹏;刘学芳;
单位：河南中医药大学呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心,河南省中医药防治呼吸病重点实验室;河南中医药大学第一附属医院;河南中医药大学第一临床医学院;河南中医药大学中医药科学院;
摘要：目的:探讨毒素清保护肺泡上皮屏障改善衰老小鼠肺炎模型的作用机制。方法:72只SPF级C57 BL/6J小鼠随机取36只颈背部皮下注射D-半乳糖200 mg/kg为衰老组，其余注射生理盐水为青年组，1次/d,连续8 w,建立衰老小鼠模型。将30只衰老小鼠和30只青年小鼠分别随机分为正常对照组、模型对照组、毒素清7.8、15.6 g/kg组、头孢曲松钠0.2 g/kg组，一次性气管内滴注肺炎克雷伯杆菌建立肺炎模型，6 h后分别灌胃给予生理盐水或相应药物，第3 d处死小鼠。计算脏器湿质量、体质量，衰老小鼠脏器指数；试剂盒检测氧化应激水平；HE染色观察肺组织病理变化；ELISA法检测炎症因子含量；蛋白质免疫印迹、免疫荧光检测闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(OCC)表达；免疫组化法观察细胞周期依赖性激酶抑制蛋白1A(P21)、髓过氧化物酶(MPO)、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白阳性表达。结果:与青年对照组比较，衰老对照组小鼠脾指数、胸腺指数、超氧化物歧化酶(SOD)活力明显降低(P<0.05或P<0.01),丙二醛(MDA)含量、P21蛋白阳性表达显著升高(P<0.01);与正常对照组比较，模型对照组肺组织见大量炎性细胞浸润，肺间质和肺泡内水肿，肺间隔增厚，肺损伤及肺泡炎评分显著升高(P<0.01);与模型对照组比较，毒素清7.8、15.6 g/kg组、头孢曲松钠0.2 g/kg组肺泡结构明显，炎性细胞浸润减轻，肺损伤及肺泡炎评分明显降低(P<0.05或P<0.01)。与青年模型对照组比较，衰老模型对照组炎性细胞浸润较重；与衰老正常对照组比较，衰老模型对照组肺泡灌洗液总细胞数和白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量、MPO、NE蛋白阳性表达水平升高(P<0.05或P<0.01),ZO-1、OCC蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01);与衰老模型对照组比较，衰老毒素清15.6 g/kg组肺泡炎评分、肺损伤评分、肺泡灌洗液总细胞数、IL-6、TNF-α含量、MPO、NE蛋白阳性表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),ZO-1、OCC蛋白表达明显升高(P<0.05或P<0.01)。网络药理学富集分析毒素清的333个核心靶点显示，毒素清改善老年人肺炎可能与EGFR、ERK、MAPK等信号通路有关。其中EGFR与毒素清的清风藤碱、异甘草素均可较好结合，且毒素清15.6 g/kg可以显著降低衰老小鼠肺炎模型肺组织p-EGFR和p-ERK表达(P<0.05或P<0.01)。结论:毒素清可以保护肺泡上皮屏障，改善衰老小鼠肺炎模型，其机制可能与抑制EGFR/ERK信号有关。
关键词：毒素清;;衰老小鼠肺炎模型;;肺泡上皮屏障;;表皮生长因子受体/细胞外信号调节激酶
基金资助：河南省高等学校重点科研项目(编号：24A360013);; 河南省本科高校青年骨干教师培养计划(编号：2023GGJS084);; 河南省高校科技创新人才支持计划(编号：24HASTIT073)
