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作者：揣强;郎晓猛;沈颖鹏;刘建平;
单位：河北中医药大学研究生学院;河北省中医院;河北省中西医结合胃肠病研究重点实验室;河北省浊毒证重点实验室;
摘要：目的:运用网络药理学、分子对接技术探究泄浊解毒方抗溃疡性结肠炎(UC)“炎-癌”转化的可能作用机制，并通过体内动物实验验证。方法:利用TCMSP、Pubchem、Swiss Target Prediction数据库检索泄浊解毒方药物成分及靶点，利用GeneCard、OMIM、TTD数据库检索溃疡性结肠炎相关结直肠癌(UC-CRC)疾病靶点，利用STRING数据库构建蛋白相互作用(PPI)网络，Matescape数据库进行基因本体论与京都基因(GO)、基因组百科全书(KEGG)分析；利用AutoDock Vina软件对筛选的核心靶点及成分进行分子对接。通过氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠(AOM/DSS)联合造模法复制UC-CRC小鼠模型，取小鼠血液及结肠组织作为标本，HE染色观察结肠病理变化；ELISA法检测小鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、IL-6、转化生长因子-β1(TGF-β1)含量；Real-time PCR法检测小鼠晚期糖基化终产物受体(Rage)、核因子-κB(Nfκb)mRNA表达；Western blot法检测小鼠晚期糖基化终末产物(AGE)、RAGE、NF-κB蛋白表达。结果:网络药理学筛选出泄浊解毒方98种活性成分，416个相关靶点，1 381个UC-CRC相关靶点，128个潜在靶点，筛选出肿瘤蛋白p53(TP53)、蛋白激酶Bα(AKT1)、c-Jun蛋白(JUN)、热休克蛋白90α(HSP90AA1)、白细胞介素-6(IL-6)5个核心靶点，筛选出槲皮素、木犀草素、汉黄芩素、山柰酚、黄芩素5个核心成分，GO分析涉及细胞对含氮化合物的反应、细胞迁移的正向调节、细胞对脂质的反应等分子过程，转录调节复合物等细胞组成，蛋白激酶活性、蛋白激酶结合等分子功能。KEGG分析涉及癌症的通路、磷脂酰肌3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、AGE/RAGE、NF-κB、Wnt等信号通路，分子对接结果显示，泄浊解毒方核心成分与核心靶点有较好的结合活性。动物实验结果显示，与正常对照组比较，模型对照组小鼠结肠组织呈黏膜内癌病理改变，血清促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著升高，抑炎因子TGF-β1含量显著降低(P<0.01),结肠组织Rage、Nfκb mRNA及AGE、RAGE、NF-κB蛋白表达显著上调(P<0.01);与模型对照组比较，泄浊解毒方38 g/kg组小鼠结肠病理以少许炎性细胞浸润为主，促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著降低，抑炎因子TGF-β1含量显著升高(P<0.01),结肠组织Rage、Nfκb mRNA及AGE、RAGE、NF-κB蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论:运用网络药理学、分子对接及动物实验探究发现，泄浊解毒方中核心成分槲皮素、木犀草素、汉黄芩素、山柰酚、黄芩素通过调控AGE/RAGE/NF-κB信号通路，抑制UC癌变过程中核心靶点TP53、AKT1、JUN、HSP90AA1、IL-6进而抗UC“炎-癌”转化。
关键词：泄浊解毒方;;溃疡性结肠炎相关结直肠癌;;晚期糖基化终末产物;;晚期糖基化终末产物受体;;核因子-κB;;炎症因子
基金资助：国家中医临床研究基地建设项目(国中医药办科技函[2018]18);; 河北省名中医传承工作室建设项目河北省中医药管理局(冀中医药函[2019]86号);; 河北省自然科学基金资助项目(编号：H2022423326)
