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作者：聂佩;顾崇怀;乔锐;郑元喜;项学军;
单位：安徽医科大学安庆医学中心,安庆市立医院;
摘要：目的:探讨黄芪甲苷对血管紧张素Ⅱ(angiotensin, Ang Ⅱ)诱导的心肌纤维化的作用及机制。方法:用不同浓度Ang Ⅱ和黄芪甲苷处理心肌成纤维细胞，以CCK-8法检测心肌成纤维细胞增殖能力，挑选最佳干预浓度及时间，最终选择1μmol/L为Ang Ⅱ最佳干预浓度，25、50、100μmol/L为黄芪甲苷干预浓度梯度，24 h为最佳干预时间。细胞分为空白对照组、空白+黄芪甲苷100μmol/L组、模型对照组、黄芪甲苷25、50、100μmol/L组。电子显微镜下观察心肌成纤维细胞形态，免疫荧光进行细胞鉴定；倒置相差显微镜下观察细胞迁移能力；透视电镜观察线粒体超微结构；流式细胞仪检测线粒体膜电位；RT-qPCR法检测心肌细胞α-平滑肌肌动蛋白(Asma)、转化生长因子-β1(Tgfb1)、结缔组织生长因子(Ctgf)、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(Lc3 Ⅱ)、自噬相关基因(Beclin1)、SQSTM1蛋白(P62)、PTEN诱导激酶(Pink1)、帕金森蛋白(Parkin) mRNA的表达；Western blot法检测心肌细胞α-SMA、TGF-β1、CTGF、LC3、Beclin1、P62、PINK1、Parkin蛋白的表达。结果:Ang Ⅱ可诱导心肌成纤维细胞增殖，黄芪甲苷各浓度可明显抑制心肌成纤维细胞的增殖(P<0.05);与空白对照组相比，模型对照组心肌成纤维细胞迁移能力明显增加，Asma、Tgfb1、Ctgf、P62 mRNA及蛋白的表达上调，线粒体结构明显损伤，线粒体膜电位水平明显降低，Lc3、Beclin1、Pink1、Parkin mRNA及蛋白的表达明显下调(P<0.05);与模型对照组相比，黄芪甲苷各组可抑制Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞的迁移，下调Asma、Tgfb1、Ctgf、P62 mRNA及蛋白的表达，清除受损线粒体，提高线粒体膜电位水平，上调Lc3、Beclin1、Pink1、Parkin mRNA及蛋白的表达(P<0.05)。结论:黄芪甲苷可通过调控线粒体自噬抑制Ang Ⅱ诱导的心肌纤维化，这一作用可能与其介导PINK1/Parkin信号通路相关。
关键词：黄芪甲苷;;血管紧张素Ⅱ;;心肌纤维化;;线粒体自噬;;PTEN诱导激酶/帕金森蛋白信号通路
基金资助：安庆市立医院院级科研项目(编号：2022aqykj20);; 安徽医科大学校科研基金(编号：2021xkj115);; 安庆市科技局科研项目(编号：2021Z2001)
