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作者：杨宇婷;陈亮亮;杨娟娟;邢婉涛;陈博阳;谢允东;赵重博;卫培峰;王斌;
单位：陕西中医药大学;陕西中医药大学第二附属医院;陕西省药品和疫苗检查中心;
摘要：目的:基于斑马鱼模型探讨补骨脂与何首乌、五味子及熟地黄反成配伍减毒作用，以HepG2细胞为模型探讨反成配伍减毒作用机制。方法:选择发育正常的72 hpf(hour post fertilization)斑马鱼幼鱼，经补骨脂及补骨脂反成配伍水提物处理后，观察斑马鱼存活率；HE染色观察斑马鱼肝组织病理变化；生化法检测组织中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)、总胆汁酸(TBA)、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的活力或含量；采用CCK-8法检测细胞存活率；流式细胞术检测细胞周期及Annexin VFITC/PI法检测细胞凋亡率；JC-1法检测线粒体膜电位；qRT-PCR法检测细胞NF-E2相关因子2(Nrf2)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、血红素氧合酶1(Ho1)、醌氧化还原酶NADH 1(Nqo1)mRNA的表达。结果:与补骨脂100μg/mL组比较，各配伍组斑马鱼肝组织脂肪变性及肝细胞水肿减轻。与空白对照组比较，补骨脂100μg/mL组斑马鱼中AST、ALT、AKP、TBA、MDA活力或含量显著升高，GSH含量显著降低(P<0.01);与补骨脂100μg/mL组比较，各配伍组斑马鱼中AST、ALT、AKP、TBA、MDA活力或含量显著降低(P<0.01),GSH含量明显升高(P<0.05或P<0.01)。补骨脂反成配伍可显著提高细胞的存活率(P<0.01),减缓补骨脂对细胞G_0/G_1期向S期转变过程中的阻滞作用并降低细胞凋亡率(P<0.01),明显升高细胞线粒体膜电位水平，明显上调Nrf2、Ho1、Nqo1 mRNA表达(P<0.05或P<0.01),显著下调Keap1 mRNA表达(P<0.01),抑制补骨脂诱导的氧化应激反应对肝脏的损伤。结论:补骨脂反成配伍何首乌、熟地黄及五味子可有效减轻补骨脂诱导的肝毒性，其作用机制可能涉及Nrf2/HO-1信号通路介导的抗氧化应激反应。
关键词：补骨脂;;肝毒性;;配伍减毒;;反成配伍;;NF-E2相关因子2/血红素氧合酶1信号通路
基金资助：陕西省“特支计划”人才项目;; 中医药“双链融合”中青年科研创新团队建设项目(编号：2022-SLRH-YQ-008)
