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作者：王晓彤;解盈盈;孙仟;薛菲;崔伟亮;汪冰;林永强;
单位：山东中医药大学药学院;山东省食品药品检验研究院/国家药监局胶类产品质量评价重点实验室/山东省中药标准创新与质量评价工程实验室/中药配方颗粒共性技术山东省工程研究中心;
摘要：目的：建立白英及其伪品的TaqMan探针实时荧光定量PCR鉴定方法，解决市场上白英与青杞混淆使用的难点问题。方法：根据白英和伪品青杞的ITS2序列，筛选获得单核苷酸多态性(SNP)位点，设计白英特异性引物及探针，建立并优化实时荧光定量PCR方法，考察不同因素组合对PCR鉴别方法的影响，并对该方法的特异性和灵敏度进行考察和验证。结果：PCR反应参数为95℃预变性3 min, 40次循环(95℃变性10 s, 66℃退火35 s);PCR反应体系为Bestar~(TM)qPCR Master Mix(Taqman Probe)10μL,探针(0.5μmol/L)1μL,上、下游引物(1μmol/L)各1μL,DNA模板0.5μL,ddH_2O 6.5μL时，正品白英可出现特异性荧光曲线，而伪品无此曲线，其检测灵敏度为0.0616 ng/μL。结论：该研究建立的白英TaqMan实时荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高，操作便利，可用于白英药材及其颗粒制剂的质量监测。
关键词：白英;;青杞;;TaqMan探针;;实时荧光定量PCR;;分子鉴定
基金资助：国家重点研发计划(中医药现代化)重点专项(2023YFC3504102);; 泉城产业领军人才支持计划创新团队项目(MRJT2105)
