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作者：孙春英;张鼎;周珂青;姜明贺;李方存;胡跃强;
单位：广西中医药大学研究生院;广西中医药大学瑞康医院重症医学科;桂林市中医医院脑病科;广西中医药大学第一附属医院脑病一区;
摘要：目的：探讨温肺降浊方通过氧糖剥夺(OGD)诱导PC12细胞损伤对FUNDC1、Fis1、Mfn1、Mfn2等线粒体外膜蛋白表达的影响，以探究该方可能的作用机制。方法：建立血管性痴呆细胞模型，设立空白对照组、模型组、多奈哌齐阳性对照组和温肺降浊方含药血清低、中、高浓度组。CCK-8法检测温肺降浊方对正常PC12细胞的毒性作用，并通过OGD方法诱导PC12细胞损伤，以确定最佳造模时间。Hoechst33342染色检测各组细胞凋亡情况，Transwell实验检测细胞迁移能力，免疫荧光化学染色检测FUNDC1、Fis1阳性细胞表达，qPCR和Western Blot检测各组细胞中FUNDC1、Fis1、Drp1、Mfn1、Mfn2 mRNA和蛋白的表达。结果：各浓度温肺降浊方含药血清对PC12细胞无毒性作用，48 h为最佳干预时间点。与空白对照组比较，模型组细胞凋亡显著增多，迁移能力显著降低，FUNDC1、Fis1阳性细胞显著增多、FUNDC1、Fis1、Drp1 mRNA和蛋白表达显著升高，Mfm1、Mfn2 mRNA和蛋白表达显著降低。与模型组比较，温肺降浊方含药血清各浓度组细胞凋亡显著减少，细胞迁移能力显著增强，FUNDC1、Fis1阳性细胞显著减少，FUNDC1、Fis1、Drp1 mRNA和蛋白表达显著降低，Mfm1、Mfn2 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论：温肺降浊方可减轻OGD诱导的PC12细胞损伤，下调FUNDC1、Fis1蛋白表达，上调Mfn1/Mfn2蛋白表达来维持线粒体动力学平衡，实现对神经元缺血缺氧损伤的神经保护作用。
关键词：温肺降浊方;;氧糖剥夺;;PC12细胞;;线粒体动力学平衡;;血管性痴呆
基金资助：国家自然科学基金项目(82260904);; 广西中医脑病临床研究中心项目(桂科AD20238028);; 国家中医药管理局高水平重点学科-中医内科学(ZYYZDXK-2023166);; 广西中医药大学“岐黄工程”高层次人才团队(202410);广西中医药大学博士研究生创新项目(YCBXJ2023010);; 广西中医药重点学科建设项目(GZXK-Z-20-13)
