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作者：朱雪敏;李鑫基;华炯钢;陈柳;叶伟成;张传亮;朱寅初;付媛;张存;云涛;
单位：河南科技大学动物科技学院;浙江省农业科学院畜牧兽医研究所;浙江省动物疫病预防控制中心;
摘要：旨在建立猫杯状病毒（FCV）反向遗传系统，以探究FCV的致病机制，为后续疫苗研发提供科学依据。以FCV HZ2024株为对象，构建DNA-launched感染性克隆系统。FCV全基因组的4个片段被依次插入pAY-CHS重组质粒后转染F81细胞并传代鉴定。结果显示，FCV HZ2024基因片段扩增后插入DNA-launched系统质粒，成功构建DNA-launched系统拯救病毒rFCV HZ2024-RE，转染细胞24 h后出现细胞病变效应，病毒滴度稳定在10~7～10~8TCID_(50)/m L。间接免疫荧光检测证实VP1蛋白抗原表位完全保留，重组病毒的衣壳蛋白成功表达。且重组病毒与亲本毒株的复制动力学高度相似，蚀斑形态无显著差异。Eco R V酶切及测序验证表明，突变位点（C7183T、A7186C）被精准引入且稳定遗传。总之，构建的DNA-launched系统实现了FCV高效拯救与精准遗传。
关键词：猫杯状病毒;;感染性克隆;;反向遗传学;;病毒拯救
基金资助：浙江省“三农九方”科技协作计划项目（2023SNJF059）
