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作者：贾东鹭;阮武营;刘飞飞;李星仪;杨澳飞;尹波;陈慧敏;陈建;魏颖;何雷;余祖华;马雪连;丁轲;陈松彪;
单位：河南科技大学动物科技学院功能微生物与畜禽健康实验室;洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室;开封市动物疫病预防控制中心;新疆农业大学;河南科技学院动物科技学院;
摘要：为建立基于牛病毒性腹泻病毒(BVDV）核心蛋白C的间接ELISA检测方法，通过PCR扩增出BVDV C基因，克隆至原核表达载体pET-32a，构建重组质粒pET-32a-C，经IPTG诱导表达纯化后免疫BABL/c小鼠制备多克隆抗体，以C蛋白为包被抗原，建立间接ELISA检测方法。结果显示，pET-32a-C重组质粒构建成功，重组C蛋白大小约为30 k Da，能够以可溶形式表达，30℃、0.8 mmol/L IPTG诱导6 h可溶性表达最佳；该蛋白免疫BABL/c小鼠后制备血清抗体效价为1∶128 000，能够特异性识别C蛋白。该ELISA检测方法的最适条件为：0.5μg/m L抗原37℃包被2 h,10 g/L BSA溶液37℃封闭3 h,1∶16 000稀释血清孵育2 h，二抗孵育40 min，避光显色10 min，阴阳性临界值判定标准为0.224，具有良好的特异性和重复性。利用本方法对未免疫接种的疑似BVDV感染的牛血清进行检测，与RT-qPCR核酸检测方法相比，二者阳性符合率达94.73%。上述结果表明，基于C蛋白建立的间接ELISA抗体检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好，为BVDV临床诊断及开发基于C蛋白的间接ELISA检测试剂盒奠定了基础。
关键词：牛病毒性腹泻病毒;;核心蛋白C;;原核表达;;多克隆抗体;;间接ELISA
基金资助：河南省科技攻关项目（252102111004）;; 河南省大学生创新训练计划项目（S202510464093）
