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作者：刘培琪;赵帅阳;罗金;姚佳丽;殷宏;关贵全;
单位：中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
摘要：为提高环形泰勒虫转化细胞的转染效率，本研究以环形泰勒虫转化细胞TaNM1为研究对象，通过体外转录（IVT）技术将编码增强绿色荧光蛋白（eGFP）的RNA，经加帽后获得eGFP m RNA，利用脂质体转染至TaNM1细胞，同时分别设置空白组作为阴性对照，脂质体和电转染p-eGFP质粒组作为阳性对照，采用Western-blot 、荧光显微镜观察以及流式细胞术检测eGFP蛋白在TaNM1细胞中的表达情况。结果显示，利用脂质体转染eGFP m RNA至TaNM1细胞中，可观察到eGFP绿色荧光，Western-blot同时检测到eGFP蛋白的表达（27 k Da），流式细胞术检测其转染效率可以达到66.22%；利用脂质体转染p-eGFP质粒和电转染p-eGFP质粒均不能在TaNM1细胞诱导表达eGFP，且电转染会引起细胞大量死亡。本研究成功建立了高效的体外转录系统，为深入研究环形泰勒虫感染与致病机制提供了技术支撑。
关键词：环形泰勒虫;;转化细胞;;体外转录;;脂质体转染
基金资助：甘肃省自然科学基金项目（24JRRA015）;; 国家自然科学基金项目（32202836）;; 国家重点研发计划项目（2023YFD-1802403）;; 甘肃省基础研究创新群体项目（22JR5RA024）;; 农业科技创新工程项目（CAAS-ASTIP-2016-LVRI）;; 国家肉牛牦牛产业技术体系项目（CARS-37）;; 国家寄生虫资源库项目（NPRC-2019-194-30）
