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作者：卢炳州;李建斌;王姿逸;杨洋;赵陇和;李亚军;刘华南;李明桂;马坤;郑海学;郭建宏;茹毅;郝荣增;
单位：中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室;甘肃省病原生物学基础学科研究中心;中农威特生物科技股份有限公司;
摘要：为探索脯氨酰寡肽酶（POP）缺失对口蹄疫病毒（FMDV）增殖的影响，采用CRISPR/Cas9基因编辑技术，通过慢病毒包装、嘌呤霉素筛选及有限稀释法单克隆培养，构建POP基因敲除的PK-15细胞系（POP-KO ），并以野生型PK-15(WT-PK-15)细胞为对照，接种FMDV后采用实时荧光定量RT-PCR检测FMDV RNA水平，通过Western-blot分析病毒结构蛋白VP1表达量及病毒滴度测定（TCID_(50)）方法综合评估POP缺失对FMDV增殖的影响。结果表明，与WT-PK-15细胞相比，POP-KO细胞中VP1蛋白表达水平显著降低（P<0.001），病毒滴度降低了1.24 lg TCID_(50)/m L(P<0.001),FMDV RNA拷贝数显著低于对照细胞（P<0.001）。本研究成功建立了POP基因敲除的PK-15细胞系，证实POP缺失可显著抑制FMDV的增殖，揭示POP是FMDV复制的关键宿主促进因子。
关键词：脯氨酰寡肽酶;;CRISPR/Cas9;;基因敲除;;口蹄疫病毒;;病毒增殖
基金资助：国家自然科学基金项目（32372990）;; 国家重点研发计划项目（2024YFD1800501）;; 甘肃省自然科学基金重点项目（23YFNA0011）;甘肃省自然科学基金项目（23JRRA549）
