来源：期刊VIP网 时间：
作者：魏炳燕;邢璐璐;张璞;孙思祺;黄舒怡;刘天龙;董彦君;
单位：中国农业大学动物医学院;
摘要：为制备猪盖塔病毒（GETV）Cap蛋白多克隆抗体并探索其应用潜力，首先构建pCold-TF-Cap重组质粒，通过0.4 mmol/L IPTG诱导高效表达可溶性TF-Cap融合蛋白。经Ni-NTA亲和层析纯化后，利用SDS-PAGE鉴定重组蛋白纯度较高，BCA法测得蛋白浓度为22 mg/m L。以纯化的融合蛋白与佐剂乳化后免疫6～8周龄BALB/c小鼠，成功制备效价达1∶128 000的鼠源多克隆抗体。通过Western-blot分析与间接免疫荧光试验（IFA），证实该多克隆抗体能够特异性识别GETV感染的BHK-21细胞内源性Cap蛋白。此外，以制备的多克隆抗体为一抗、酶标羊抗鼠Ig G为二抗，建立了检测GETV感染小鼠脾和肝组织中Cap蛋白的免疫组织化学（IHC）检测方法。结果显示，阳性信号清晰定位于细胞质中，呈现明显的棕色信号。本研究成功制备了特异性强的GETV Cap蛋白多克隆抗体，并建立了配套IHC检测方法，为GETV的基础研究和临床诊断提供了可靠的免疫学工具。
关键词：盖塔病毒;;Cap蛋白;;原核表达;;多克隆抗体;;免疫组织化学
基金资助：国家重点研发计划项目（2024YFD1800200）;; 中国农业大学2115人才工程项目
