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作者：段蕊;王思睿;赵昱源;王梦奇;陆沪江;何沛霞;孙树民;
单位：内蒙古民族大学动物科技学院;云南农业大学动物医学院;
摘要：针对猪囊尾蚴丝氨酸蛋白酶抑制剂B6(Ts-serpin B6)和4848(Ts-serpin 4848)抗原表位暴露不充分，缺乏高特异性问题，拟通过筛选关键抗原表位增强抗原特异性。首先对Ts-serpin B6和Ts-serpin 4848基因序列进行生物信息学表位分析，筛选出优势抗原表位，设计特异性引物后经PCR分别扩增靶基因片段。将纯化的PCR产物连接到pET-28a（+）载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，构建pET28a(+)-Tsserpin B6、pET28a(+)-Ts-serpin 4848的分段原核表达载体，转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达，目的蛋白纯化后进行SDS-PAGE鉴定和Western-blot分析。SDS-PAGE结果显示，成功表达纯化了6个重组目的蛋白Ts-serpin B6(a)、Ts-serpin B6(b)、Ts-serpin B6(c)和Ts-serpin 4848(a)、Ts-serpin 4848(b)、Tsserpin 4848(c)，其在大肠杆菌中主要以包涵体形式存在。Western-blot和ELISA结果表明重组蛋白Ts-serpin B6(a)和Ts-serpin 4848(a)与其他分段重组蛋白相比具有更强的反应原性和特异性。结论：明确Ts-serpin B6(a)和Ts-serpin 4848(a)是抗原的优势表位，为猪囊尾蚴病特异性诊断试剂研发提供了依据。
关键词：猪囊尾蚴;;丝氨酸蛋白酶抑制剂;;优势抗原表位;;鉴定表达
基金资助：国家自然科学基金项目（31960707,32160842,32460893）;; 内蒙古自治区科技计划项目（2022YFDZ0049）;; 云南省科技厅科技计划项目（202504BI090003）;; 内蒙古自治区直属高校基本科研业务费项目（GXKY22042）;; 云南省重大科技专项（202402AE090074）;; 建设面向南亚东南亚科技创新中心专项（202403AP140033）
