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作者：赵嘉豪;李树凡;薛凤;王君;张灿;刘文华;徐守振;
单位：青岛农业大学动物医学院;
摘要：为了制备牛病毒性腹泻病毒（BVDV）单克隆抗体及建立抗原捕获ELISA检测方法，采用大肠杆菌原核表达的BVDV Erns截短蛋白免疫BALB/c小鼠，三免后利用细胞融合和杂交瘤筛选，选用效价高的单克隆抗体，通过条件优化建立BVDV抗原捕获ELISA检测方法，对其特异性、敏感性和重复性进行了验证，并与IDEXX商品化试剂盒及RT-PCR进行临床样品符合。结果显示，获得2株效价较高的Ig G1型单克隆抗体杂交瘤细胞2B3、2B10，轻链均为κ链。选用效价更高的2B10单克隆抗体作为检测抗体，家兔源BVDV多克隆抗体作为捕获抗体，建立的BVDV抗原捕获ELISA与临床常见病原（牛轮状病毒、牛冠状病毒、牛副流感病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒、牛支原体）无交叉反应，最低可检测10~(2.53)TCID_(50)的BVDV病毒液，批内和批间变异系数均低于5%，与IDEXX试剂盒和RT-PCR的总体符合率分别为91.76%～93.33%和94.12%～96.67%。结果表明，基于2B10单克隆抗体建立的BVDV抗原捕获ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，为BVDV的检测和防控提供了借鉴和技术手段。
关键词：牛病毒性腹泻病毒;;Erns蛋白;;单克隆抗体;;ELISA
基金资助：国家重点研发计划项目（2018YFD0501403）
