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作者：杜鹏飞;彭听雨;范双旗;郑海学;朱紫祥;陈金顶;
单位：华南农业大学兽医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室兰州大学动物医学院;
摘要：利用CRISPR/Cas9技术构建鸟嘌呤富含序列因子1(GRSF1)基因敲除的PK-15细胞并探究GRSF1基因敲除对于细胞活性的影响。首先，设计了4条靶向猪源GRSF1基因的sgRNAs(sgRNA-1、sgRNA-2、sgRNA-3和sgRNA-4)，经退火后与慢病毒载体质粒（Lenti-CRISPR v2）连接。随后将构建成功的慢病毒载体与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染人胚胎肾细胞（HEK-293T），获得慢病毒并感染PK-15细胞。最终经嘌呤霉素筛选和梯度稀释法获得GRSF1敲除的PK-15单克隆细胞系。通过Western-blot及测序验证GRSF1的敲除效率，然后进行单克隆细胞活性检测及IL-6水平检测。结果表明，本研究成功获得3株GRSF1基因敲除成功的PK-15单克隆细胞系，并证实GRSF1基因敲除影响PK-15细胞中IL-6表达的上调，为后续研究猪GRSF1的生物学功能提供细胞模型。
关键词：GRSF1;;PK-15;;CRISPR/Cas9;;基因敲除
基金资助：国家重点研发计划项目（2021YFD1800300）;; “十四五”广东省农业科技创新十大主攻方向“揭榜挂帅”项目（2024KJ14）;; 中央高校基本科研业务费专项（lzujbky-2022-ct02）;; 甘肃省科技计划基金项目（24JRRA813）;; 甘肃省创新群体项目（23JRRA546）;; 国家生猪产业技术体系项目（CARS-35-017）;; 国家生猪技术创新中心项目（NCTIP-XD/C03）
