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作者：周月;赵志军;
单位：宁夏医科大学第一临床医学院;
摘要：为了探究Ⅰ型GT1株弓形虫ROP16蛋白不同功能截短体（激酶域与N端保守基序）对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞周期、增殖、凋亡及迁移的影响，解析其抗肿瘤活性的分子结构关键功能域。首先基于NCBI-CDD预测ROP16功能域，构建ROP16激酶域截短体（357～707aa）及N端截短体（1～356aa）慢病毒载体；建立MDA-MB-231稳转细胞系，通过CCK8、流式凋亡/周期检测、划痕/Transwell试验评估功能域对细胞表型的影响；结合RT-qPCR、Western-blot分析凋亡相关基因（BAX/BCL2/CASP3）的m RNA及蛋白表达。结果显示，ROP16_(1～356)截短体可显著抑制MDA-MB-231细胞增殖（P<0.05），促进细胞凋亡（P<0.05），引起G2/M期阻滞，同时上调促凋亡因子BAX、Caspase3表达；而ROP16_(357～707)截短体非但不具抗肿瘤活性，反而促进细胞增殖（P<0.05），加速有丝分裂进程，并显著增强细胞的转移（P<0.01）及侵袭能力（P<0.05）。本研究首次证实ROP16 N端保守基序（1～356aa）在抗肿瘤作用中起核心作用，揭示了ROP16不同功能截短体对肿瘤细胞的差异性调控，为基于ROP16蛋白开发新型抗肿瘤生物制剂提供了关键理论依据与研究方向。
关键词：弓形虫;;ROP16蛋白;;截短体;;MDA-MB-231细胞;;表型
基金资助：中央引导地方科技发展专项（2024FRD05043）;; 宁夏回族自治区重点研发计划项目（2023BEG02002）
