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作者：杨毅;阿安拉木;王成财;杨佩瑶;王小龙;杜新潮;陈韵;窦永喜;任善会;张学勇;李志;付永;沈秀英;郭志宏;高小龙;朵红;
单位：青海大学畜牧兽医科学院;甘肃农业大学;中国农业科学院兰州兽医研究所;青海省动物疾病病原诊断与绿色防控技术研究重点实验室;青海大学农牧学院;
摘要：本试验旨在制备抗羊口疮病毒（ORFV）ORF011蛋白的多克隆抗体，为研究ORFV的致病机制及疫苗防控策略提供生物学材料。利用SVMTriP和IEDB网站在线生物信息学分析软件预测ORFV ORF011蛋白序列的B细胞抗原表位，发现ORFV ORF011蛋白存在多个B细胞抗原表位。PCR扩增ORFV ORF011全长基因，连接至经Bam HⅠ和Eco RⅠ双酶切后的载体pET-28a上构建原核表达重组质粒，将构建成功的重组质粒（pET28a-ORFV-ORF011）转化感受态细胞Rosetta，经IPTG诱导成功表达ORF011蛋白，该蛋白主要以包涵体形式存在。ORF011蛋白的最佳诱导表达条件：诱导温度为37℃，IPTG最佳浓度为0.5 mmol/L，最佳诱导时间为12 h。目的蛋白经变性、复性纯化后免疫小鼠获得的多克隆抗体具有良好的特异性，效价可达1∶256 000，中和抗体效价可达1∶400。本试验证实ORFV ORF011蛋白是良好的抗原和免疫原，能够诱导BALB/c小鼠产生具有中和活性的多克隆抗体，在羊口疮诊断试剂和疫苗研制中具有重要应用价值。
关键词：羊口疮病毒;;ORFV ORF011蛋白;;B细胞表位;;多克隆抗体
基金资助：青海省科技计划科技援青合作专项（2022-QY-207）;; 国家绒毛用羊产业技术体系建设专项（CARS-39-13）;; 高校教师创新基金项目（2025A-326）;; 甘肃省自然科学基金项目（24JRRE011）
