来源：期刊VIP网 时间：
作者：马莉莉;王琼娴;王晓丽;马孙婷;吕立新;徐彬;冯志新;欧阳伟;
单位：南京农业大学动物医学院;江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部部兽用生物制品工程技术重点实验室;江苏大学食品与生物工程学院;兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
摘要：噬菌体MS2 VLP(噬菌体病毒样颗粒)是不含病毒遗传物质的纳米颗粒，可以自组装成一个二十面体衣壳，适合靶向传递RNA。本研究利用Bac-to-Bac系统(杆状病毒表达系统)生产MS2 VLP包裹的eGFP mRNA。分别设计、合成MS2 VLP的表达框和eGFP mRNA的表达框，将MS2 VLP的表达框和eGFP mRNA的表达框同时插入pFastBac Dual载体中，获得重组供体质粒pFastBacDual-MS2-eGFP mRNA。转化DH10Bac感受态，通过三抗和蓝白斑(卡拉霉素/庆大霉素/四环素/IPTG/X-Gal)筛选以及PCR鉴定，获得重组的rBacmid-MS2-eGFP mRNA。将rBacmid-MS2-eGFP mRNA转染sf9昆虫细胞，获得重组杆状病毒vBacmid-MS2-eGFP mRNA。通过倒置荧光显微镜观察及Western blot检测表明eGFP获得表达。用vBacmid-MS2-eGFP mRNA感染High 5悬浮细胞进行MS2-eGFP mRNA的大量表达，经超速离心纯化，电镜观察可见大量的直径约30 nm的病毒样颗粒(VLP)。提取纯化的MS2 VLP中包裹的mRNA，通过RT-PCR及测序鉴定，结果表明MS2 VLP中包裹的mRNA为eGFP mRNA。将MS2-eGFP mRNA免疫BALB/c小鼠，进行免疫原性研究，通过ELISA测得的抗体效价为1:819 200，表明MS2-eGFP mRNA可以刺激小鼠产生较强的抗原特异性抗体应答。以上结果表明，利用杆状病毒Bac-to-Bac表达系统生产的MS2 VLP可以包裹外源mRNA，并可将外源mRNA递送到小鼠体内产生特异性体液免疫反应。本研究建立了基于杆状病毒Bac-to-Bac表达系统的VLP递送mRNA疫苗研究平台，为今后动物传染病的mRNA疫苗研发提供新的参考。
关键词：Bac-to-Bac;;MS2 VLP;;递送系统;;mRNA疫苗
基金资助：国家重点研发计划政府间国际科技创新合作重点专项(2019YFE0107300);; 国家自然科学基金(32072872);; 江苏省农业科技自主创新资金项目(CX(20)3095)
