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作者：何宇婷;郭晴晴;岳永程;贾静;韩艳辉;周岩;卢丽丹;唐文强;洪炀;傅志强;
单位：中国农业科学院上海兽医研究所国家动物血吸虫病参考实验室;中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心)国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室(中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所);贵州省疾病预防控制中心;西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所;海南热带病研究中心(国家热带病研究中心海南分中心);
摘要：片形吸虫病主要是由大片形吸虫(Fasciola gigantica)和肝片形吸虫(Fasciola hepatica)寄生在草食性哺乳动物或人肝胆内引起的一种人畜共患寄生虫病。片形吸虫中存在的硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(TGR)是其氧化还原系统中一个含硒的多功能酶。本研究对大片形吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(FgTGR)进行了克隆、表达及纯化，并制备其多克隆抗体。通过PCR方法扩增了含开放阅读框(ORF)的FgTGR序列与含硒蛋白序列的FgTGR序列(FgTGRsec)，分别构建了克隆质粒pMD19T-FgTGR和表达质粒pET28a(+)-FgTGRsec。将pET28a(+)-FgTGRsec单独转入BL21(DE3)感受态细胞后进行诱导表达，此外，将pET28a(+)-FgTGRsec与pSUABC质粒共同转入BL21(DE3)感受态细胞后进行表达，并对表达后的这两种重组蛋白分别进行纯化。以纯化的重组FgTGR蛋白(rFgTGR)作为免疫抗原对BALB/c小鼠进行皮下免疫，制备多克隆抗体。FgTGR ORF为1920 bp，编码639个氨基酸，理论分子量约为70 kDa，FgTGRsec基因片段为1968 bp，编码656个氨基酸，表达的重组蛋白理论分子量约为72 kDa，两者在大肠杆菌中表达的重组蛋白在蛋白电泳结果中均符合预测大小。成功制备了针对rFgTGR的多克隆抗体，将该抗体1∶400稀释后作为蛋白免疫印迹实验的一抗，可成功地检测到rFgTGRsec条带。本研究成功表达了含硒蛋白和不含硒蛋白的重组FgTGR蛋白，制备了针对FgTGR蛋白的多克隆抗体，为FgTGR的酶动力学研究及其抑制物的筛选提供了基础。
关键词：大片形吸虫;;硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶;;表达纯化;;多克隆抗体
基金资助：贵州省科技计划项目(黔科合支撑[2023]一般183);; 西藏自治区科技计划项目(XZ202101ZD0002N);; 中国农业科学院科技创新工程
