来源：期刊VIP网 时间：
作者：王安铖;李俊波;胡一帆;孟鑫;陈玲超;童武;单同领;于海;孔宁;刘雪兰;童光志;徐家萍;郑浩;
单位：中国农业科学院上海兽医研究所;安徽农业大学生命科学学院;东北林业大学野生动物学院;安徽农业大学动物医学院;
摘要：为了制备高活性的非洲猪瘟病毒p72蛋白，本研究优化合成了非洲猪瘟B646L和B602L全基因序列，并分别克隆进pFastBac Dual载体中，构建了重组质粒pBac-B602L-B646L。将pBac-B602L-B646L转化感受态细胞DH10Bac中，经过蓝白斑纯化和PCR鉴定，获得重组杆状质粒rBacmid-p72。将rBacmid-p72转染到sf9昆虫细胞中，获得重组杆状病毒。通过IFA和Western blot分析，证实rBac-p72感染sf9表达p72和pB02L。以rBac-p72感染悬浮培养的sf9细胞，并通过Ni柱亲和层析获得了纯化的p72蛋白。以p72蛋白包被酶标板，通过间接ELISA检测，显示纯化的p72蛋白能与ASFV阳性血清中的抗体良好结合。上述研究结果表明，本研究通过杆状表达的p72蛋白具有较高的活性，为下一步开展p72蛋白功能及应用研究打下良好的基础。
关键词：非洲猪瘟病毒;;杆状病毒表达;;p72蛋白;;抗原性
基金资助：国家重点研发计划项目(2021YFD1801300);; 上海市自然基金项目(20ZR1469500);; 上海市科技创新行动计划项目(20392002500)
