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作者：王星翔;赵颖;任俏同;王鹤霏;蒲刚;历春;
单位：北华大学基础医学院免疫学教研室;吉林大学第一医院肿瘤妇科;
摘要：目的：探讨M2巨噬细胞在非小细胞肺癌（NSCLC）上皮-间质转化（EMT）和顺铂（DDP耐药中的作用，阐明核因子κB (NF-κB)信号通路的调控机制。方法：选取人单核细胞白血病THP-1细胞，通过佛波酯（PMA）诱导分化为M0巨噬细胞，白细胞介素（IL）-4和IL-13联合诱导M0巨噬细胞分化为M2巨噬细胞。采用Western blotting法和免疫荧光法检测M0和M2巨噬细胞中CD163、CD86及精氨酸酶1 (Arg-1)蛋白表达情况。选取人NSCLC细胞A549，采用Transwell小室分别与M0和M2巨噬细胞非接触式共培养，细胞分为A549+M0组（A549细胞与M0巨噬细胞共培养）、A549+M2组（A549细胞与M2巨噬细胞共培养）和A549+M2+BAY11-7082组（A549细胞与M2巨噬细胞共培养后加入10 mmol·L~(-1) NF-κB抑制剂BAY11-7082）。细胞划痕实验检测各组A549细胞划痕愈合率，Transwell小室实验检测各组A549细胞中侵袭细胞数，细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法检测共培养体系中DDP处理的各组A549细胞生长抑制率和半数抑制浓度（IC_(50)）值，Western blotting法检测各组A549细胞中波形蛋白（Vimentin）、E钙黏蛋白（E-cadherin）、N钙黏蛋白（N-cadherin）、转录因子Snail、磷酸化P65 (p-P65)、P糖蛋白（P-gp）和细胞程序性死亡配体1 (PD-L1)蛋白表达水平。结果：Western blotting法，与M0组比较，M2组巨噬细胞中CD163和Arg-1蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）,CD86蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。免疫荧光法，与M0组比较，M2组巨噬细胞中CD163蛋白表达增强，CD86蛋白表达减弱。细胞划痕实验，培养24和48 h时，与A549+M0组比较，A549+M2组A549细胞划痕愈合率均明显升高（P<0.05）;3组共培养体系中，与A549+M0组比较，A549+M2组A549细胞划痕愈合率明显升高（P<0.05）；与A549+M2组比较，A549+M2+BAY11-7082组A549细胞中划痕愈合率明显降低（P<0.05）。Transwell小室实验，与A549+M0组比较，A549+M2组A549细胞中侵袭细胞数明显增加（P<0.05）；与A549+M2组比较，A549+M2+BAY11-7082组A549细胞中侵袭细胞数明显减少（P<0.05）;3组共培养体系中，与A549+M0组比较，A549+M2组A549细胞中侵袭细胞数明显增加（P<0.05）。CCK-8法，2.50、5.00、10.00、20.00和40.00 mg·L~(-1) DDP处理后，与A549+M0组比较，A549+M2组A549细胞生长抑制率均明显降低（P<0.05或P<0.01）,IC_(50)值均明显升高（P<0.01）;3组共培养体系中，与A549+M0组比较，A549+M2组A549细胞生长抑制率均明显降低（P<0.05或P<0.01）, IC_(50)值均明显升高（P<0.01）；与A549+M2组比较，A549+M2+BAY11-7082组A549细胞生长抑制率明显升高（P<0.05）, IC_(50)值均明显降低（P<0.05）。Western blotting法，与A549+M0组比较，A549+M2组A549细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）;3组共培养体系中，与A549+M0组比较，A549+M2组A549细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,N-cadherin、Snail、Vimentin和p-P65蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）；与A549+M2组比较，A549+M2+BAY11-7082组A549细胞中，E-cadherin蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,Vimentin、N-cadherin和p-P65蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。与A549+M0组比较，A549+M2组A549细胞中P-gp和PD-L1蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）;3组共培养体系中，与A549+M0组比较，A549+M2组A549细胞中P-gp和PD-L1蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）；与A549+M2组比较，A549+M2+BAY11-7082组A549细胞中P-gp和PD-L1蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。结论：M2巨噬细胞可调控NSCLC细胞EMT促进肿瘤侵袭转移，调控P-gp和PD-L1蛋白表达促进DDP耐药，其作用机制可能与NF-κB信号通路有关。
关键词：肿瘤相关巨噬细胞;;非小细胞肺癌;;核因子κB;;上皮-间质转化;;顺铂
基金资助：吉林省卫健委卫生健康科技能力提升项目（2023JC033）
