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作者：王书利;李梦含;高萌萌;王倩;郑好;张荷婷;李志强;李启峰;
单位：商丘师范学院生物与食品学院;天康生物制药有限公司;
摘要：本研究旨在分析布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统(T4SS)效应蛋白BPE043在布鲁氏菌感染过程和调控细胞凋亡基因表达中的作用。以流产布鲁氏菌2308(S2308)为亲本株，通过同源重组的方法构建布鲁氏菌BPE043基因缺失株(2308ΔBPE043)和回补株(2308ΔBPE043-C)。将亲本株、缺失株和回补株在相同起始浓度下培养，观察它们的生长变化。亲本株、缺失株和回补株感染小鼠，测定小鼠脾脏的荷菌量。亲本株、缺失株和回补株侵染小鼠巨噬细胞RAW 264.7，检测细菌的胞内存活能力。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot技术检测布鲁氏菌侵染后细胞凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Bax和Bcl-2的表达水平。结果显示，亲本株、缺失株和回补株在体外培养的生长趋势基本相同。2308ΔBPE043感染小鼠脾脏的荷菌量显著低于S2303感染组，且在感染2周后，缺失株感染组脾脏荷菌量的下降趋势较亲本株感染组明显。布鲁氏菌侵染宿主细胞8 h后，2308ΔBPE043的胞内存活能力显著低于S2308。布鲁氏菌侵染宿主细胞24 h后，2308ΔBPE043侵染组凋亡基因Caspase-3、Caspase-8和Bax表达水平显著高于S2308侵染组，Bcl-2表达水平显著低于S2308侵染组。2308ΔBPE043侵染组Caspase-3和Caspase-8的蛋白表达水平，以及Caspase-3和Caspase-8的活性显著高于S2308侵染组。本研究发现，T4SS效应蛋白BPE043在布鲁氏菌感染和胞内存活过程中发挥重要作用，是布鲁氏菌重要的毒力因子，为进一步探究BPE043在布鲁氏菌持续性感染中的作用奠定了基础。
关键词：布鲁氏菌;;BPE043;;胞内存活;;毒力;;凋亡
基金资助：河南省高等学校重点科研项目(21A230015);; 河南省重点研发与推广专项(科技攻关)项目(212102310746);; 河南省绿色功能饲料添加剂开发与应用工程技术研究中心
