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作者：张芳源;杜文琪;杨大为;李桂梅;单虎;
单位：青岛农业大学动物医学院;山东省新兽药创制协同创新中心;山东省兽药诊断试剂工程技术研究中心;
摘要：为建立口蹄疫病毒(FMDV)快速、高效的血清学检测方法，根据GenBank收录的FMDV-O型国内流行株VP1基因(GenBank登录号：JN998085.1)，构建重组质粒pCold TF-VP1，通过原核表达系统获得VP1蛋白。通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达和反应原性后，将纯化后的蛋白作为抗原，建立FMDV抗体间接ELISA方法。结果显示，重组质粒成功转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，并以可溶性蛋白形式表达。建立的FMDV抗体间接ELISA方法其抗原包被最佳浓度0.5 μg/mL，使用1%BSA溶液封闭效果最佳，血清最佳稀释度1∶600，酶标二抗最佳工作浓度1∶8000，且具有良好的特异性、灵敏性和重复性，与商品化试剂盒比较，符合率为90.2%。本试验在大肠杆菌中成功表达并纯化了FMDV的VP1蛋白，并建立了FMDV抗体间接ELISA方法，为口蹄疫的监测、诊断及试剂盒的开发提供了参考。
关键词：口蹄疫病毒;;VP1蛋白;;原核表达;;间接ELISA
基金资助：科技创新2030—重大项目课题(2021ZD0113802)
