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作者：刘梅芬;马震原;王淑娟;闫若潜;班付国;赵雪丽;谢彩华;王东方;柴茂;刘影;杨海波;王翠;
单位：河南省动物疫病预防控制中心河南省重大动物疫病监测预警及防控重点实验室;
摘要：为建立猪伪狂犬病病毒gB抗体竞争酶联免疫检测方法，以大肠杆菌表达并纯化的gB 蛋白为包被抗原，以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗gB蛋白单克隆抗体为酶标抗体，经各反应条件的优化，成功建立了PRV gB抗体的竞争酶联免疫检测方法，并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了评估。PRV gB抗体竞争酶联免疫检测方法经优化后的最佳条件为：gB蛋白的最佳包被浓度为0.25 μg/mL、包被量100 μL/孔，酶标抗体的最佳稀释浓度为1∶1000，样品检测时间为30 min(抗原抗体反应)+ 15 min(底物显色)；敏感性结果显示，PRV gB标准阳性血清(Z89)经1∶512稀释后经检测仍为阳性；特异性结果显示，猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、大肠杆菌抗体阳性血清的检测结果均为阴性；批内、批间重复试验结果显示，批内、批间变异系数分别为0.24%～9.45%、0.58%～11.61%，均小于12%。通过对采集的184份临床血清检测结果进行比较，该方法与商品化试剂盒的阳性符合率为96.23%，阴性符合率为96.95%，总符合率96.74%。本研究在国内首次建立PRV gB竞争酶联免疫检测方法，为PRV gB抗体快速检测提供了可靠的技术手段。
关键词：猪伪狂犬病病毒;;gB蛋白;;竞争酶联免疫
基金资助：2022年度河南省重大科技专项(221100110600);; 2022年度河南省重点研发与推广专项(222102110121、222102110289、222102110227);; 河南省现代农业产业技术体系课题(豫财科[2020]92号)
