来源：期刊VIP网 时间：
作者：刘闰栀;杨昱;何杰珩;刘兆洁;闫玉淋;郭锦玥;袁生;池仕红;梁昭平;黄淑坚;冯军;温峰;
单位：佛山大学生命科学与工程学院;广东省华晟生物技术有限公司;华南农业大学兽医学院;
摘要：为了表达一株华南地区某鹅场分离的鹅呼肠孤病毒(Goose reovirus, GRV)的σC蛋白，并利用诱导表达后的σC蛋白制备兔抗σC蛋白多克隆抗体，试验通过构建σC蛋白原核表达质粒，转化大肠杆菌Rosetta (DE3)感受态细胞，经SDS-PAGE和Western-blot鉴定σC蛋白是否成功表达，然后对诱导条件进行优化并大量表达目的蛋白；采用Ni离子亲和层析柱纯化σC蛋白，经尿素梯度复性、聚乙二醇20000浓缩后4次免疫新西兰大白兔，收集血清，制备多克隆抗体；采用Western-blot、IFA和ELISA等方法分别测定多克隆抗体的特异性、亲和力及效价。结果表明：通过定向酶切验证，成功构建了pET-32a-GD/88-σC原核表达质粒。SDS-PAGE和Western-blot验证该蛋白的分子量(49 ku)与预测结果一致。在IPTG终浓度为0.8 mmol/L,37℃诱导8 h,σC蛋白表达量较高。ELISA检测多克隆抗体效价为1∶1 638 400,制备的σC蛋白和兔多克隆抗体能特异性识别结合。说明本研究成功通过表达GRVσC蛋白制备了兔抗σC蛋白多克隆抗体，该抗体具有良好的免疫原性。
关键词：鹅呼肠孤病毒;;S4基因;;σC蛋白;;原核表达;;蛋白纯化;;多克隆抗体
基金资助：广东省教育厅科研项目(2022KTSCX124);; 广州市增城创业领军团队项目(202101001)
