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作者：田维;黄适;周炜潜;周丽洁;覃秋云;方威龙;杜怡;
单位：广西中医药大学附属瑞康医院消化内科;广西中医药大学附属国际壮医医院壮瑶医药研究实验室;广西中医药大学附属瑞康医院神经内科;
摘要：目的：探讨安肠汤调控巨噬细胞miRNA-155及防治IBS-D的作用机制。方法：(1)CCK-8法检测不同浓度(2.5%、5%、10%、20%、40%)安肠汤含药血清对小鼠巨噬细胞RAW 264.7活力的影响并观察细胞形态；(2)考察过表达及敲低miRNA-155对LPS诱导下RAW264.7细胞的影响，将RAW264.7细胞分为正常对照组、模型组、miRNA-155 mimic NC组、miRNA-155 mimic组、inhibitor NC组、inhibitor组；(3)考察miRNA-155过表达下安肠汤含药血清对LPS诱导下RAW264.7细胞的影响，将RAW264.7细胞分为miRNA-155 mimic NC正常对照组、miRNA-155 mimic NC组、miRNA-155 mimic组、miRNA-155 mimic+安肠汤含药血清(20%)组。采用ELISA法检测细胞IL-1β、IL-18分泌水平；RT-PCR检测各组细胞中ERK1、NLRP3、Caspase-1 mRNA和miRNA-155表达；Western Blot检测各组细胞中ERK1、p-ERK1、NLRP3、Caspase-1蛋白表达。结果：(1)与对照组比较，20%、40%安肠汤含药血清组细胞活力显著升高(P<0.05或P<0.01),但40%安肠汤含药血清可使细胞产生梭形分化、长角，毛刺。(2)与正常对照组比较，模型组细胞IL-1β、IL-18分泌量显著升高，ERK1、NLRP3、Caspase-1 mRNA和miRNA-155表达显著升高，ERK1、p-ERK1、NLRP3、Caspase-1蛋白表达显著升高(P<0.05～P<0.0001)。与miRNA-155 mimic NC组比较，iRNA-155 mimic组细胞IL-1β、IL-18分泌量显著升高，ERK1、NLRP3、Caspase-1 mRNA和miRNA-155表达显著升高，ERK1、p-ERK1、NLRP3、Caspase-1蛋白表达显著升高(P<0.05～P<0.0001)。与miRNA-155 inhibitor NC组比较，miRNA-155 inhibitor组细胞IL-1β、IL-18分泌量显著降低，ERK1、NLRP3、Caspase-1 mRNA和miRNA-155表达显著降低，ERK1、p-ERK1、NLRP3、Caspase-1蛋白表达显著降低(P<0.05～P<0.0001),LPS可使细胞产生梭形分化、长角，毛刺。(3)与miRNA-155 mimic NC正常对照组比较，miRNA-155 mimic NC组细胞IL-1β、IL-18释放量显著升高，ERK1、NLRP3、Caspase-1 mRNA和miRNA-155表达显著升高，ERK1、p-ERK1、NLRP3、Caspase-1蛋白表达显著升高(P<0.05～P<0.0001)。与miRNA-155 mimic组比较，miRNA-155 mimic+安肠汤含药血清组细胞IL-1β、IL-18释放量显著降低，ERK1、NLRP3、Caspase-1 mRNA和miRNA-155表达显著降低，ERK1、p-ERK1、NLRP3、Caspase-1蛋白表达显著降低(P<0.05～P<0.0001),安肠汤含药血清组细胞呈现圆形或椭圆形的形态。结论：安肠汤防治IBS-D的炎症机制可能与调节miRNA-155表达进而调控ERK1/NLRP3信号通路有关。
关键词：肠易激综合征;;miRNA-155;;巨噬细胞;;炎症反应;;安肠汤
基金资助：国家自然科学基金项目(82060845);; 广西研究生教育创新计划项目(YCSY2023039)
