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作者：赵春丽;周永强;晏合吕;吕享;
单位：贵州中医药大学药学院;贵州省现代中药创制全省重点实验室;
摘要：目的：对小花清风藤叶内生真菌进行分离与鉴定并评价其药理活性。方法：采用组织块分离法对小花清风藤叶内生真菌进行分离。将分离得到的菌株L-53发酵提取DNA,采用PCR技术获得其ITS序列扩增产物，并进一步测序分析，结合菌落形态、显微观察对菌株L-53进行鉴定；采用纸片扩散法、二倍稀释法评价菌株L-53的抑菌活性，采用结晶紫染色法评价菌株L-53对细菌生物膜形成的影响，并用扫描电镜(SEM)观察细菌形态的变化。分别采用2,2-联苯基-1-苦基肼基自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)及2,2-联氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS~+)清除法评价菌株L-53菌体甲醇提取物的体外抗氧化活性。结果：菌株L-53无分生孢子结构，其菌落表面不平，菌落中心呈灰色，分子鉴定显示菌株L-53与球座菌属Guignardia sp.在系统进化树中为同一分支，最终确定菌株L-53是球座菌属真菌。体外抑菌活性显示Guignardia sp.对供试细菌表现出一定抑菌效果，其中乙酸乙酯萃取物抑制金黄色葡萄球菌的MIC为0.79 mg/mL,正丁醇萃取物抑制金黄色葡萄球菌的MIC为0.23 mg/mL,正丁醇萃取物对不同供试细菌生物膜的形成有抑制作用，SEM显示正丁醇萃取物可以影响金黄色葡萄球菌的形态。体外抗氧化活性显示，菌株Guignardia sp.的菌体甲醇提取物具有一定的抗氧化活性。结论：小花清风藤叶内生真菌菌株Guignardia sp.L-53的代谢产物中含有抑菌及抗氧化活性成分，值得深入研究。
关键词：小花清风藤;;内生真菌;;球座菌;;抑菌活性;;抗氧化
基金资助：贵州省中医药管理局中医药、民族医药科学技术研究课题(QZYY-2020-040);; 贵州省科技厅基础研究计划项目(黔科合基础-ZK[2023]一般419);; 贵州省现代中药创制全省重点实验室(黔科合平台[2025]019)
